caveolin-3 CRISPR/Cas9 KOプラスミド (h): sc-400569

概要

CAV3はカベオリン3をコードしており、カベオリン3は筋肉に豊富なカベオラの構造要素として、膜マイクロドメインを組織化し、筋細胞膜（サルコレマ）上でシグナル伝達複合体の足場（スキャフォールド）を形成します。カベオリン3は、受容体やキナーゼを区画化することで、機械的ストレスからの保護や膜輸送に寄与するとともに、GPCRシグナル、インスリン受容体シグナル、イオンチャネル制御、一酸化窒素（NO）シグナルに関わる経路を調節します。横紋筋では、T管（T-tubule）の構築、興奮収縮連関、ならびにジストロフィン関連タンパク質複合体の安定化を支えます。CAV3の機能や発現の異常は、骨格筋および心筋に影響するカベオリン病（caveolinopathies）と関連しており、ジストロフィー様表現型、心筋症、不整脈に関わる機序などが含まれます。そのため、膜シグナル伝達や筋組織の健全性に関する研究において重要な標的となります。

caveolin-3 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）は、human細胞株におけるCAV3遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、CAV3内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、CAV3のオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、caveolin-3タンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、caveolin-3シグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、CAV3欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• caveolin-3の機能に不可欠なCAV3エクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、CAV3ゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• caveolin-3 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）およびcaveolin-3 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h2）によってコードされるgRNAは、CAV3遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  caveolin-3 HDRプラスミド（h）および caveolin-3 HDRプラスミド（h2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはCAV3ホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のCAV3標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。