caveolin-3 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h): sc-400569

Übersicht

CAV3 kodiert Caveolin-3, eine in Muskelgewebe stark angereicherte strukturelle Komponente der Caveolae, die Membran-Mikrodomänen organisiert und Signalkomplexe am Sarkolemm als Gerüstprotein zusammenführt. Caveolin-3 trägt zur mechanischen Schutzfunktion und zum Membrantransport bei und moduliert durch die Kompartimentierung von Rezeptoren und Kinasen Signalwege, die GPCR-Signalisierung, Insulinrezeptor-Signalisierung, die Regulation von Ionenkanälen sowie die Stickstoffmonoxid(NO)-Signalgebung umfassen. In quergestreifter Muskulatur unterstützt es die Organisation der T-Tubuli, die Erregungs‑Kontraktions‑Kopplung und die Stabilität des dystrophinassoziierten Proteinkomplexes. Eine veränderte Funktion oder Expression von CAV3 ist mit Caveolinopathien verbunden, die Skelett- und Herzmuskel betreffen, darunter dystrophe Phänotypen, Kardiomyopathie und arrhythmieassoziierte Mechanismen, was CAV3 für Studien zur Membransignalisierung und Muskelintegrität relevant macht.

Das caveolin-3 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des CAV3-Gens in human-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des CAV3-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von CAV3 nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die caveolin-3-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von CAV3-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der caveolin-3-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf CAV3-Exone abzielen, die für die caveolin-3-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere CAV3-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom caveolin-3 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) und vom caveolin-3 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des CAV3-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das caveolin-3 HDR-Plasmid (h) und caveolin-3 HDR-Plasmid (h2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von CAV3-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten CAV3-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.