caveolin-3 CRISPR Activationプラスミド (h): sc-400569-ACT

ヒトCAV3は、筋肉に豊富に発現するカベオラの構造要素であるカベオリン3をコードしており、膜マイクロドメインを組織化するとともに、筋形質膜（サルコレマ）上でシグナル伝達タンパク質の足場（スキャフォールド）として機能します。カベオリン3は、筋の興奮性や代謝に関与するイオンチャネルやキナーゼの区画化を調節することで、メカノトランスダクション、脂質恒常性、受容体関連経路に影響を与えます。CAV3の発現量やカベオラ構造の破綻は、筋ジストロフィーや心筋症などを含む骨格筋・心筋の機能障害と関連しており、筋線維の安定性やストレス応答における重要性が示されています。これらの特性により、カベオリン3は、ヒトモデル系における膜輸送、シグナル伝達、筋細胞分化を研究するための有用な切り口となります。

caveolin-3 CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性CAV3の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

caveolin-3 CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における CAV3 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はCAV3転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性caveolin-3の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のCAV3遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるcaveolin-3依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびCAV3発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるcaveolin-3経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。