Plasmide CRISPR/Cas9 KO CAR1/2 (m): sc-419458

Présentation

Nr1i3 code le récepteur nucléaire « constitutive androstane receptor » (CAR1/2), un facteur de transcription régulé par des ligands qui agit comme capteur central des xénobiotiques et des endobiotiques dans le foie et l’intestin de la souris. Une fois activé, CAR forme des hétérodimères avec RXR et se lie à des éléments de réponse afin de réguler les enzymes et transporteurs de métabolisation de phases I/II, notamment les voies des cytochromes P450, la glucuronidation et la gestion des acides biliaires. La signalisation de CAR interagit avec les réponses au stress oxydant, le métabolisme des lipides et du glucose, ainsi que les programmes de prolifération des hépatocytes, façonnant les réponses adaptatives aux médicaments et aux substances chimiques environnementales. Une activité dérégulée de Nr1i3 a été associée à une modification du devenir des médicaments, à une susceptibilité accrue aux lésions cholestatiques et à des phénotypes métaboliques pertinents pour la toxicologie et les modèles de maladies hépatiques.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO CAR1/2 (m) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène Nr1i3 dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du Nr1i3, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert Nr1i3 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine CAR1/2.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en Nr1i3 pour l'étude de la signalisation de CAR1/2, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de Nr1i3 essentiels à la fonction de CAR1/2
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de Nr1i3 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le CAR1/2 plasmide CRISPR/Cas9 KO (m) et le CAR1/2 plasmide CRISPR/Cas9 KO (m2) ciblent des sites distincts au sein du locus Nr1i3. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le CAR1/2 plasmide HDR (m) et le CAR1/2 (m2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie Nr1i3 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles Nr1i3 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.