CapG CRISPR Activation Plasmid (h): sc-416526-ACT

CAPG kodiert CapG, ein calciumabhängiges Aktin-bindendes Protein der Gelsolin/Villin-Familie, das die barbed Ends (Plusenden) von Aktinfilamenten kappt, ohne sie zu durchtrennen, und dadurch die kortikale Aktinorganisation und den Umbau des Zytoskeletts mitprägt. CapG reguliert Membranruffles, Phagozytose, Zelladhäsion und Zellmotilität und verknüpft extrazelluläre Signale mit dynamischen Veränderungen der Zellarchitektur. Diese Funktionen stellen eine Verbindung von CAPG zu Signalwegen her, die die Aktinpolymerisation und zytoskelettgetriebenen Transportprozesse steuern, einschließlich solcher, die durch GTPasen der Rho-Familie und integrinassoziierte Signalgebung koordiniert werden. Eine fehlregulierte CAPG-Expression wurde mit veränderten Migrations- und Invasionsphänotypen in Verbindung gebracht und wird häufig im Kontext der Tumorprogression, der Makrophagenfunktion und entzündlicher Mikroumgebungen untersucht.

CapG Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen CAPG-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

CapG Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des CAPG-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der CAPG-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen CapG-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native CAPG-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von CapG-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des CapG-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem CAPG-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.