Plasmide Double Nickase (h) CaMKKβ: sc-400928-NIC

CAMKK2 code la protéine kinase kinase 2 dépendante du calcium/de la calmoduline (CaMKKβ), une kinase en amont Ser/Thr qui relie la signalisation Ca2+–calmoduline à la phosphorylation d’AMPK et de CaMKI/CaMKIV, coordonnant ainsi la détection de l’état énergétique cellulaire, les programmes transcriptionnels et les réponses au stress dépendantes du calcium. Par l’intermédiaire de ces nœuds, CaMKKβ influence le remodelage métabolique, la fonction mitochondriale, l’autophagie, ainsi que des voies en aval telles que mTOR et la signalisation associée à CREB. L’activité de CAMKK2 a été étudiée dans des contextes incluant le métabolisme des cellules cancéreuses, l’inflammation et la polarisation des cellules immunitaires, ainsi que la signalisation neuronale, ce qui en fait une cible utile pour disséquer les cascades de kinases pilotées par le calcium. La perturbation de CAMKK2 peut modifier les phénotypes de prolifération et de survie, et a été associée à des modifications pertinentes pour la maladie de la régulation métabolique et neuroendocrinienne dans des systèmes expérimentaux.

CaMKKβ Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus CAMKK2 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de CAMKK2. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de CAMKK2. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de CAMKK2.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.