Plásmido Doble Nickase (h) Calregulin: sc-400775-NIC

El gen humano **CALR** codifica la calreticulina, una chaperona luminal del retículo endoplásmico y una proteína de alta capacidad de unión a Ca²⁺ que favorece el plegamiento y el control de calidad de las glicoproteínas mediante el ciclo calnexina/calreticulina y la degradación asociada al retículo endoplásmico (ERAD). La calreticulina regula la homeostasis intracelular del calcio y se integra con la señalización del estrés del retículo endoplásmico y la respuesta a proteínas mal plegadas (UPR), influyendo en la apoptosis, la adhesión celular y procesos relacionados con la inmunidad a través de cambios en la señalización dependiente de calcio. La desregulación de la actividad de **CALR** se ha vinculado con alteraciones de la proteostasis y la adaptación al estrés en biología del cáncer, así como con mutaciones de **CALR** asociadas a neoplasias mieloproliferativas que perturban redes de señalización posteriores. Estas características hacen de **CALR** un nodo de estudio frecuente que conecta la proteostasis del retículo endoplásmico, la señalización del calcio y las respuestas celulares al estrés.

Calregulin El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus CALR en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de CALR. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de CALR. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.

Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con CALR alterado.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.