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cadherin-19CRISPR激活质粒(h) | sc-401716-ACT | 20 µg | $397.00 | |||
cadherin-19CRISPR激活质粒(h2) | sc-401716-ACT-2 | 20 µg | $397.00 |
人类 CDH19 基因编码钙黏附蛋白-19(cadherin-19),这是一种钙依赖性的细胞—细胞黏附分子,有助于维持组织结构,并支持神经系统中的协同细胞信号传导。作为经典钙黏附蛋白家族成员,钙黏附蛋白-19 通过同源性相互作用参与黏着连接(adherens junction)的组装,并与连环蛋白(catenins)及肌动蛋白细胞骨架实现功能耦联,从而影响依赖黏附的通路,这些通路调控细胞极性、迁移与分化。CDH19 的表达与发育程序和谱系决定相关,因此对于研究复杂组织中改变细胞连接性与细胞状态转换的机制具有重要意义。由钙黏附蛋白介导的黏附失调常与疾病相关的细胞行为变化有关,包括异常分化与侵袭性表型,这也推动了在神经生物学与癌症相关模型中围绕 CDH19 的研究。
cadherin-19 CRISPR激活质粒(h)提供了一种靶向、非破坏性的方法,可在不改变底层DNA序列的情况下上调内源性CDH19的表达。
cadherin-19 CRISPR激活质粒(h)是一个由三条质粒组成的协同激活介导(SAM)系统,旨在对人类细胞系中的CDH19基因座进行高效、位点特异性的转录上调。该系统以一种携带两个失活突变(D10A 和 N863A)的无催化活性的 Cas9(dCas9)为核心,这些突变消除了核酸酶活性,同时保留了 DNA 结合能力。该 dCas9 与强效转录激活因子 VP64 融合,并与用于筛选的布拉西定抗性基因共同表达。第二个质粒编码MS2-p65-HSF1融合蛋白——这一二级激活复合物与dCas9-VP64协同作用,并携带潮霉素抗性基因。第三个质粒编码靶标特异性20 nt sgRNA,其与两个MS2 RNA适配体融合,这些适配体可将MS2-p65-HSF1复合物招募至激活位点,并携带嘌呤霉素抗性基因。这三个质粒按1:1:1的质量比递送,以确保系统所有组分的平衡表达。
在靶位点组装完成后,SAM复合物结合于CDH19转录起始位点上游约200 bp处,VP64、p65和HSF1在此协同作用,招募转录 machinery并驱动内源性cadherin-19表达上调。与具有核酸酶活性的Cas9不同, dCas9不会引入双链断裂或修改基因组序列,从而保留了原生的CDH19位点,并能够研究内源性位点上依赖于cadherin-19的转录反应,使其成为功能研究、靶基因鉴定以及在CDH19表达被沉默或降低的肿瘤细胞中模拟cadherin-19通路恢复的宝贵工具。
仅供研究使用。不用于诊断或治疗。