Not CRISPR data: the image illustrates antibody quality for visualizing CRISPR experiment results.
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CA IV Plásmido CRISPR/Cas9 KO (m): sc-419454
- Especies Diana: mouse
- 20 µg de plásmido de ADN purificado listo para la trasfección; suficiente para 20 transfecciones máximo
- CA IV El plásmido CRISPR/Cas9 Knockout (KO) (m) es un conjunto de plásmidos, cada uno de los cuales codifica la nucleasa Cas9 y un ARN guía (gRNA) de 20 nt específico para el objetivo, diseñado para lograr la máxima eficiencia de knockout utilizando secuencias derivadas de la biblioteca GeCKO v2
- Las secuencias de gRNA dirigen a Cas9 para que induzca roturas de doble cadena (DSB) específicas en el locus genómico CA IV, lo que da lugar a la inactivación del gen mediante unión de extremos no homólogos (NHEJ)
- Los genes de resistencia a la puromicina y RFP están flanqueados por sitios LoxP, lo que permite la eliminación de los marcadores de selección mediante la recombinasa Cre (Vector Cre: sc-418923) tras el establecimiento de líneas celulares knockout estables
- Tras la transfección, la eficacia del knockout puede comprobarse mediante WB, IF ó IHC utilzando el anticuerpo: CA IV Anticuerpo (H-5): sc-74446
Información sobre pedidos
| Nombre del producto | Número de catálogo | UNIDAD | Precio | CANTIDAD | Favoritos | |
CA IV Plásmido CRISPR/Cas9 KO (m) | sc-419454 | 20 µg | $397.00 |
Descripción general
El gen Car4 de ratón codifica la anhidrasa carbónica IV (CA IV), una enzima extracelular anclada a GPI que cataliza la hidratación reversible del CO₂ para formar bicarbonato y protones, lo que contribuye a la regulación local del pH y al transporte de bicarbonato. Al acoplarse funcionalmente a procesos de transporte iónico, la CA IV contribuye a la homeostasis CO₂/HCO₃⁻, que influye en la fisiología epitelial y endotelial, el intercambio gaseoso y el equilibrio ácido‑base del microambiente. La actividad de Car4 se estudia comúnmente en el contexto del manejo del bicarbonato en pulmón y riñón, así como en las respuestas tisulares a alteraciones del pH y de los niveles de CO₂. Una amortiguación dependiente de anhidrasa carbónica desregulada puede afectar procesos relacionados con la inflamación, la remodelación asociada a hipoxia y vías de estrés metabólico.
El plásmido CRISPR/Cas9 KO CA IV (m) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen Car4 en líneas celulares mouse. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del Car4 junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.
El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de Car4 tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína CA IV.
Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en Car4 para la investigación de la señalización de CA IV, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.
Características principales
- sgRNA dirigidos a los exones de Car4 críticos para la función de CA IV
Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de Car4 para mejorar la eficiencia del knockout
Compatible con la administración mediante transfección
Variantes de diseño
CRISPRs +/- HDRs
- Los gRNA codificados por el plásmido CA IV CRISPR/Cas9 KO (m) y el plásmido CA IV CRISPR/Cas9 KO (m2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus Car4. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR CA IV (m) y el plásmido HDR CA IV (m2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología Car4 para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana Car4 definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.