CA II Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h): sc-401059

Visão geral

A anidrase carbônica II (CA II), codificada pelo gene humano CA2, é uma metaloenzima citosólica de alta atividade que catalisa a hidratação reversível do CO₂ em bicarbonato e prótons, regulando assim o pH intracelular, o transporte de CO₂ e a disponibilidade de bicarbonato. Por meio do acoplamento a transportadores de bicarbonato e a mecanismos de manuseio de prótons, a CA II sustenta a homeostase ácido–base em diversos tecidos e contribui para processos como o transporte iônico epitelial, a reabsorção óssea mediada por osteoclastos e a troca gasosa em eritrócitos. A atividade de CA2 se cruza com a regulação metabólica sensível ao pH e com respostas celulares ao estresse, nas quais alterações na função da anidrase carbônica podem influenciar a sinalização e a atividade enzimática a jusante da dinâmica de prótons. Perturbações genéticas e funcionais de CA2 têm sido associadas a distúrbios do equilíbrio ácido–base e da mineralização, tornando-o um alvo útil para estudos mecanísticos da fisiologia dependente de pH e de fenótipos celulares relevantes para doenças.

O Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO CA II (h) é um conjunto de plasmídeos concebido para a interrupção direcionada do gene CA2 em linhas celulares human. Cada plasmídeo coexpressa um RNA guia único (sgRNA) direcionado a um local distinto dentro do CA2, juntamente com a nuclease Cas9 de Streptococcus pyogenes. Os plasmídeos também codificam GFP, permitindo a identificação fluorescente e o enriquecimento de células transfectadas com sucesso por microscopia de fluorescência ou citometria de fluxo.

O design multiguia aumenta a probabilidade de gerar inserções ou deleções (indels) que interrompem o quadro de leitura aberto do CA2 na sequência da formação de quebras de cadeia dupla mediadas por Cas9. As quebras de ADN introduzidas pelo sistema CRISPR/Cas9 são reparadas através de vias endógenas de junção de extremidades não homólogas (NHEJ), resultando frequentemente em mutações de deslocamento de quadro que abolir a expressão da proteína CA II.

Este sistema de knockout CRISPR permite a geração eficiente de modelos celulares com deficiência de CA2 para a investigação da sinalização de CA II, estudos de genómica funcional, investigação em biologia do cancro e avaliação de respostas terapêuticas em linhas celulares humanas.

Características principais

• sgRNAs direcionados para o(s) exão(ões) CA2 críticos para a função CA II
  Coexpressão de SpCas9 e sgRNA a partir de um único plasmídeo para simplificar a administração
  Repórter GFP para identificação de células transfectadas
  Conjunto de plasmídeos direcionados para múltiplos locais genómicos CA2 para melhorar a eficiência do knockout
  Compatível com administração por transfecção

Variantes de Design

CRISPRs +/- HDRs

• Os gRNAs codificados pelo CA II Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h) e pelo CA II Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h2) têm como alvo locais distintos dentro do locus CA2. Pode estar disponível um ou ambos os designs de alvo. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.
  As construções doadoras HDR codificadas pelo CA II Plasmídeo HDR (h) e o Plasmídeo HDR CA II (h2) contêm uma cassete de resistência à puromicina e um repórter RFP flanqueado por braços de homologia CA2 para suportar a reparação dirigida por homologia em locais-alvo CA2 definidos, correspondentes aos desenhos de KO CRISPR/Cas9. A disponibilidade do doador HDR pode variar. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.