C8β CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h): sc-408409

Übersicht

C8B kodiert die Beta-Kette der Komplementkomponente C8 (C8β), eine essenzielle Untereinheit des C8-Heterotrimers (C8α, C8β, C8γ), das an der terminalen Komplementaktivierung beteiligt ist. In den klassischen, Lektin- und alternativen Komplementkaskaden trägt C8β zur Stabilisierung des Aufbaus des Membranangriffskomplexes (MAC; C5b-9) auf Zielmembranen bei, fördert die Porenbildung und damit die lytische Effektorfunktion. Diese Aktivität unterstützt die angeborene Immunabwehr, inflammatorische Signalwege sowie die Wechselwirkung mit Opsonisierung und gerinnungsbezogenen Prozessen. Eine veränderte Funktion des terminalen Komplementsystems, einschließlich einer Dysregulation des MAC, ist mit einer erhöhten Infektanfälligkeit und immunvermittelten Gewebeschädigungen assoziiert, was C8B als relevantes Ziel für die Immunologie- und Entzündungsforschung ausweist.

Das C8β CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des C8B-Gens in human-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des C8B-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von C8B nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die C8β-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von C8B-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der C8β-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf C8B-Exone abzielen, die für die C8β-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere C8B-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom C8β CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) und vom C8β CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des C8B-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das C8β HDR-Plasmid (h) und C8β HDR-Plasmid (h2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von C8B-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten C8B-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.