C8β CRISPR/Cas9 KOプラスミド (h): sc-408409

概要

C8Bは補体成分C8のβ鎖（C8β）をコードしており、終末補体活性化に関与するC8ヘテロ三量体（C8α、C8β、C8γ）を構成する必須サブユニットです。古典経路、レクチン経路、代替経路の各補体系カスケードにおいて、C8βは標的膜上で膜攻撃複合体（MAC；C5b-9）の集合を安定化し、孔形成と溶解性エフェクター機能を促進します。この活性は、自然免疫防御、炎症シグナル伝達、ならびにオプソニン化や凝固関連プロセスとのクロストークに寄与します。MACの調節異常を含む終末補体機能の変化は、感染症への感受性や免疫介在性の組織障害と関連することから、C8Bは免疫学および炎症研究における重要な標的として位置づけられます。

C8β CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）は、human細胞株におけるC8B遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、C8B内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、C8Bのオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、C8βタンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、C8βシグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、C8B欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• C8βの機能に不可欠なC8Bエクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、C8Bゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• C8β CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）およびC8β CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h2）によってコードされるgRNAは、C8B遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  C8β HDRプラスミド（h）および C8β HDRプラスミド（h2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはC8Bホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のC8B標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。