Not CRISPR data: the image illustrates antibody quality for visualizing CRISPR experiment results.
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C3aR Double Nickaseプラスミド (h): sc-401448-NIC
- 対象生物種: human
- 20 µg のトランスフェクション準備済み、精製したプラスミドDNA、～20回トランスフェクション
- C3aR Double Nickaseプラスミド (h)はペアのプラスミドを含みます。それぞれのプラスミドはD10A変異したCas9 nuclease、及びCRISPR/Cas9 KOの対応よりも高い特異性で遺伝子発現をノックアウトするように設計された標的特異的な20 ntガイドRNA (gRNA)をコードします。
- ペアリングしたガイドRNAは、約20 bpでずらすことにより、ゲノムDNAの特定Cas9媒介のdouble nickingを可能にし、DSBを模造します。
- ペアの1つのプラスミドは選択用のピューロマイシン耐性遺伝子を含みます；ペアのほかの1つのプラスミドは、視覚的にトランスフェクションを確認するGFPマーカーを含みます。
- C3aRダブルニカースプラスミド（h）およびC3aRダブルニカースプラスミド（h2）は、C3AR1を標的とする異なるペアのgRNA設計をコードしています。いずれか一方、あるいは両方のデザインが利用可能である場合があります
- トランスフェクションの後、遺伝子ノックアウト効果は、抗体を用いたWB、IFまたはIHCによって検定されることができます: C3aR 抗体 (D-12): sc-133172
注文情報
| 製品名 | カタログ # | 単位 | 価格 | 数量 | お気に入り | |
C3aR Double Nickaseプラスミド (h) | sc-401448-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
C3aR Double Nickaseプラスミド (h2) | sc-401448-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
C3AR1 は補体成分3a受容体（C3aR）をコードしており、C3aR はアナフィラトキシンである C3a に結合する G タンパク質共役型受容体（GPCR）として、補体活性化と細胞応答を結び付ける役割を担います。C3aR シグナル伝達は Gαi/Gαq 経路を介して細胞内カルシウム動態、MAPK/ERK カスケード、ならびに白血球の移動や炎症性メディエーター放出を規定する走化性プログラムを調節します。骨髄系細胞や組織常在性免疫細胞において、C3aR は自然免疫シグナルをサイトカインネットワークと統合し、バリア機能や神経—免疫間コミュニケーションにも影響し得ます。C3AR1 活性の破綻は、炎症性・自己免疫性表現型、感染に伴う免疫病態、腫瘍微小環境のリモデリングに関与することが示唆されており、補体駆動性疾患の生物学を機序的に解明する研究における標的として有用です。
C3aR ダブルニカースプラスミド（h）は、human 細胞株における C3AR1 座の高特異性編集のために設計された、対となる2つのプラスミドから構成される。各プラスミドは、Cas9 D10Aニカースと、C3AR1内の対向するDNA鎖を標的とする異なるsgRNAを発現する。対向するDNA鎖上の隣接する部位に誘導されると、2つのニカースはオフセットした一本鎖切断を生成し、これらが組み合わさってずれた二本鎖切断を生じさせる。これにより、両方のガイドによる協調的なオンターゲット活性が必要となる。生じたDNA切断は、細胞内の内在性修復経路、特に非相同末端結合（NHEJ）によって修復され、その結果、C3AR1の機能を阻害する挿入または欠失が生じる。標的座標における2つのsgRNAの結合を必要とするこの二重ニッキング法は、編集の特異性を高め、標的精度に対するさらなる制御が求められる用途において、CRISPR戦略を補完するものである。
編集された細胞を効率的に同定するために、1つのプラスミドはトランスフェクトされた細胞集団を蛍光可視化するためのGFPをコードし、もう1つのプラスミドは抗生物質選別用のプロマイシン耐性遺伝子を保有しています。これらの機能により、共トランスフェクトされた細胞集団の効率的な濃縮が可能となり、C3AR1が破壊されたクローンの検証が簡素化されます。
研究用のみ。診断用または治療用ではありません。