Plásmido CRISPR de Activación (m2) C3: sc-419391-ACT-2

El componente 3 del complemento (C3) en el ratón codifica la proteína efectora central del sistema del complemento, cuya activación proteolítica en C3a y C3b impulsa la opsonización, la eliminación de complejos inmunes, la quimiotaxis y la amplificación de las respuestas inmunitarias innatas a través de las vías clásica, de las lectinas y alternativa. La deposición de C3b favorece la formación de la convertasa de C5 y se conecta con los receptores del complemento para modular la fagocitosis y el procesamiento de antígenos, vinculando la actividad del complemento con la señalización inflamatoria y la comunicación cruzada con los programas de coagulación y de lesión tisular. La activación desregulada de C3 se ha implicado en modelos de susceptibilidad a infecciones, patología autoinmunitaria y mediada por complejos inmunes, neuroinflamación e inflamación metabólica, lo que refleja su amplia influencia en la defensa del huésped y la inmunopatología. La edición genética de C3 en el ratón permite estudios mecanísticos de las funciones efectoras dependientes del complemento, la activación específica de cada vía y las contribuciones a nivel de tipo celular a la inflamación y a fenotipos relevantes para la enfermedad in vivo y en sistemas de células inmunitarias primarias.

C3 El plásmido de activación CRISPR (m2) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de C3 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

C3 El plásmido de activación CRISPR (m2) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus C3 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional C3, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de C3. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo C3 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de C3 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía C3 en células tumorales con expresión de C3 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.