C-Nap1 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m): sc-421134

Übersicht

Cep250 kodiert C-Nap1, ein zentrosomales Coiled-Coil-Protein, das an den proximalen Enden der Zentriolen angereichert ist und dort zur Kohäsion des Zentrosoms sowie zur Organisation des perizentriolären Materials beiträgt. C-Nap1 wirkt im Rahmen zellzyklusregulierter Zentrosom-Dynamiken und koordiniert sich mit Kinase-Signalwegen und Gerüstproteinen, um die Ausbildung einer bipolaren Spindel, die korrekte Chromosomensegregation und die Aufrechterhaltung der Mikrotubulus-Architektur zu unterstützen. Störungen der Zentrosom-Kohäsion und der Spindel-Integrität sind in Modellsystemen eng mit genomischer Instabilität, veränderter Zellteilung sowie Entwicklungs- oder neurodegenerativen Phänotypen verbunden. In Studien an Mauszellen und -geweben ist Cep250 daher ein nützlicher Ansatzpunkt, um zentrosomenassoziierte Signalwege zu untersuchen, die Proliferation, Differenzierung und Gewebehomöostase beeinflussen.

Das C-Nap1 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des Cep250-Gens in mouse-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des Cep250-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von Cep250 nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die C-Nap1-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von Cep250-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der C-Nap1-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf Cep250-Exone abzielen, die für die C-Nap1-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere Cep250-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom C-Nap1 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) und vom C-Nap1 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des Cep250-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das C-Nap1 HDR-Plasmid (m) und C-Nap1 HDR-Plasmid (m2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von Cep250-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten Cep250-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.