c-Mpl CRISPR/Cas9 KOプラスミド (h): sc-403035

概要

MPLはトロンボポエチン受容体c-Mplをコードしており、c-Mplは主に造血幹／前駆細胞および巨核球系譜に発現するI型サイトカイン受容体で、自己複製、生存、血小板産生を制御します。リガンド結合によりJAK2依存性シグナル伝達が活性化され、下流のSTAT、PI3K/AKT、MAPK/ERK経路が骨髄ニッチにおける増殖および分化プログラムを協調的に制御します。MPLシグナルの破綻や受容体機能の変化は、異常な巨核球形成や骨髄系疾患の病態と関連し、サイトカイン応答性の異常や幹細胞恒常性の破綻に結びつく表現型も含まれます。系譜特異性が高く、経路出力が明確に定義された受容体であることから、c-Mplはサイトカインシグナル、造血運命決定、受容体介在性フィードバック制御を解析するための扱いやすい結節点となります。

c-Mpl CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）は、human細胞株におけるMPL遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、MPL内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、MPLのオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、c-Mplタンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、c-Mplシグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、MPL欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• c-Mplの機能に不可欠なMPLエクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、MPLゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• c-Mpl CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）およびc-Mpl CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h2）によってコードされるgRNAは、MPL遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  c-Mpl HDRプラスミド（h）および c-Mpl HDRプラスミド（h2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはMPLホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のMPL標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。