C/EBP ε CRISPR Activation Plasmid (h): sc-402310-ACT

CEBPE kodiert C/EBPε, einen auf myeloische Zellen beschränkten bZIP-Transkriptionsfaktor, der die späten Phasen der Granulopoese und die funktionelle Reifung von Neutrophilen koordiniert. Durch Bindung an CCAAT/Enhancer-Elemente und in Zusammenarbeit mit Linienregulatoren wie GFI1 und SPI1/PU.1 moduliert C/EBPε transkriptionelle Programme, die den Austritt aus dem Zellzyklus, die Expression von Granulaproteinen und angeborene Immun-Effektormechanismen steuern. Eine Störung der CEBPE-Expression oder -Aktivität beeinträchtigt die Differenzierung von Neutrophilen und ist mit defekter Granulozytenfunktion verbunden, was CEBPE zu einem hilfreichen Knotenpunkt für die Untersuchung hämatopoetischer Entwicklung und inflammatorischer Signalwege macht. In Modellen der Krebs- und Immunbiologie kann eine veränderte CEBPE-regulierte Transkription als Ausleseparameter für eine fehlregulierte myeloische Linienfestlegung und den Reifungszustand dienen.

C/EBP ε Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen CEBPE-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

C/EBP ε Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des CEBPE-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der CEBPE-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen C/EBP ε-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native CEBPE-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von C/EBP ε-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des C/EBP ε-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem CEBPE-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.