BTG2 CRISPR Activationプラスミド (h): sc-401022-ACT

BTG2（B-cell translocation gene 2）は、細胞増殖を抑制する即時早期タンパク質をコードしており、転写コレギュレーターおよびmRNAのデアデニル化を調節する因子として機能することで、細胞周期の進行や細胞ストレス応答を制御する遺伝子発現プログラムの形成に関与します。BTG2はしばしばp53の下流で誘導され、CCR4–NOT複合体の構成要素や他の制御性補因子との相互作用を介して、G1/Sチェックポイント制御、分化、アポトーシスを促進するシグナル伝達を統合します。BTG2の発現異常は、複数のがん関連の文脈において増殖制御の破綻やゲノム安定性の乱れと関連づけられており、また転写および転写後制御に対する広範な作用を通じて、炎症や神経生物学的過程との関連も示されています。これらの特性により、BTG2は、ヒト細胞における増殖制御ネットワーク、DNA損傷応答シグナル、ならびに状況依存的な転写プログラムの組み替えを研究する上で有用な結節点となります。

BTG2 CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性BTG2の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

BTG2 CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における BTG2 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はBTG2転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性BTG2の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のBTG2遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるBTG2依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびBTG2発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるBTG2経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。