BRWD1 Particelle di Attivazione Lentivirale (h): sc-405121-LAC

BRWD1 (bromodomain and WD repeat domain containing 1) codifica una proteina associata alla cromatina che integra il riconoscimento degli istoni acetilati mediato dal bromodominio con interazioni proteiche dipendenti da ripetizioni WD, contribuendo a plasmare i programmi trascrizionali. BRWD1 è stato collegato alla regolazione dell’accessibilità della cromatina, all’espressione genica specifica del tipo cellulare e a processi di sviluppo, inclusi ruoli nella differenziazione della linea germinale e di quella immunitaria. Grazie alla sua funzione nel controllo epigenetico e nella regolazione della trascrizione, l’alterazione dell’attività di BRWD1 viene studiata in contesti di proliferazione deregolata, difetti di differenziazione e stati di espressione genica associati a malattia, rilevanti per l’oncologia e l’immunobiologia.

Le particelle di attivazione lentivirale BRWD1 (h) rispondono a questa esigenza incapsulando il sistema completo di attivazione trascrizionale del mediatore di attivazione sinergica (SAM) in particelle lentivirali ad alto titolo pronte per la trasduzione, consentendo un'efficiente sovraregolazione di BRWD1 in una gamma più ampia di tipi di cellule umane.

Le particelle di attivazione lentivirale BRWD1 (h) veicolano tutti i componenti funzionali del sistema del mediatore di attivazione sinergica (SAM) tramite trasduzione lentivirale. Il sistema comprende tre preparati di particelle co-trasdotti nelle cellule bersaglio: uno che codifica per dCas9 cataliticamente inattivo (mutazioni D10A e N863A) fuso al dominio di transattivazione VP64 con un gene di resistenza alla blasticidina; una che codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1 con un gene di resistenza all'igromicina; e una che codifica un sgRNA di 20 nt specifico per il bersaglio fuso a due aptameri di RNA MS2 con un gene di resistenza alla puromicina. A seguito della trasduzione lentivirale e dell'integrazione genomica dei cassetti di espressione, i componenti del SAM vengono espressi in modo stabile e si assemblano nel locus bersaglio all'interno della regione promotrice prossimale a monte del sito di inizio della trascrizione BRWD1, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo cooperativo per reclutare il machinery trascrizionale endogeno e guidare una sovraregolazione sostenuta dell'espressione endogena di BRWD1. L'uso di dCas9 inattivo nei confronti delle nucleasi evita l'introduzione di rotture del DNA a doppio filamento e preserva il locus genomico nativo BRWD1 e l'architettura regolatoria.

Il formato lentivirale offre diversi vantaggi pratici: l'integrazione genomica stabile supporta l'attivazione ereditaria attraverso le divisioni cellulari; le preparazioni di particelle ad alto titolo eliminano la necessità di una produzione virale interna; e la compatibilità con tipi di cellule primarie, non in divisione e resistenti alla trasfezione amplia l'accessibilità sperimentale. Il successo della trasduzione può essere confermato e potenziato attraverso una selezione antibiotica tripla utilizzando puromicina, igromicina e blasticidina.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.