Brn-3b/BRN3B/POU4F2 Plásmido CRISPR/Cas9 KO (h): sc-400382

Descripción general

POU4F2 (Brn-3b/BRN3B) codifica un factor de transcripción con dominio POU que regula programas de expresión génica específicos de tipo celular, con funciones destacadas en la diferenciación neuronal y el mantenimiento de la identidad de las neuronas sensoriales, en particular en las células ganglionares de la retina. Al unirse a motivos de ADN tipo octámero, BRN3B coordina redes transcripcionales que controlan el desarrollo, la supervivencia y las respuestas al estrés, interactuando con vías más amplias de regulación transcripcional que determinan las decisiones de destino celular. La alteración de la actividad de POU4F2 se ha vinculado con una diferenciación desregulada y con cambios dependientes del contexto en la proliferación y la apoptosis, lo que lo hace relevante para estudios de mecanismos del neurodesarrollo y la neurodegeneración, así como de la reprogramación transcripcional asociada al cáncer. Como factor definidor de linaje, se utiliza con frecuencia como marcador y como nodo funcional en modelos que investigan la identidad neuronal y la transcripción dependiente de estímulos.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO Brn-3b/BRN3B/POU4F2 (h) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen POU4F2 en líneas celulares human. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del POU4F2 junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de POU4F2 tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína Brn-3b/BRN3B/POU4F2.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en POU4F2 para la investigación de la señalización de Brn-3b/BRN3B/POU4F2, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de POU4F2 críticos para la función de Brn-3b/BRN3B/POU4F2
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de POU4F2 para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido Brn-3b/BRN3B/POU4F2 CRISPR/Cas9 KO (h) y el plásmido Brn-3b/BRN3B/POU4F2 CRISPR/Cas9 KO (h2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus POU4F2. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR Brn-3b/BRN3B/POU4F2 (h) y el plásmido HDR Brn-3b/BRN3B/POU4F2 (h2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología POU4F2 para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana POU4F2 definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.