Brn-3b/BRN3B/POU4F2 CRISPR/Cas9 KOプラスミド (h): sc-400382

概要

POU4F2（Brn-3b/BRN3B）は、細胞種特異的な遺伝子発現プログラムを制御するPOUドメイン転写因子をコードしており、神経分化および感覚ニューロンのアイデンティティ維持において重要な役割を担います。とりわけ網膜神経節細胞で顕著です。BRN3Bはオクタマー様のDNAモチーフに結合することで、発生・生存・ストレス応答を制御する転写ネットワークを統括し、細胞運命決定を形作るより広範な転写調節経路とも連携します。POU4F2活性の変化は、分化の異常や、状況依存的な増殖・アポトーシスの変動と関連づけられており、神経発生・神経変性の機序研究に加え、がんに伴う転写ネットワークの再配線の研究にも関連します。系譜を規定する因子として、神経細胞アイデンティティや刺激依存的転写を検証するモデルにおいて、マーカーおよび機能的ハブとしてしばしば用いられます。

Brn-3b/BRN3B/POU4F2 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）は、human細胞株におけるPOU4F2遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、POU4F2内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、POU4F2のオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、Brn-3b/BRN3B/POU4F2タンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、Brn-3b/BRN3B/POU4F2シグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、POU4F2欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• Brn-3b/BRN3B/POU4F2の機能に不可欠なPOU4F2エクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、POU4F2ゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• Brn-3b/BRN3B/POU4F2 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）およびBrn-3b/BRN3B/POU4F2 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h2）によってコードされるgRNAは、POU4F2遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  Brn-3b/BRN3B/POU4F2 HDRプラスミド（h）および Brn-3b/BRN3B/POU4F2 HDRプラスミド（h2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはPOU4F2ホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のPOU4F2標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。