Not CRISPR data: the image illustrates antibody quality for visualizing CRISPR experiment results.
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BRDG1 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m): sc-425307
- Zielspezies: mouse
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- BRDG1 Das CRISPR/Cas9-Knockout (KO)-Plasmid (m) ist ein Pool von Plasmiden, von denen jedes für die Cas9-Nuklease und eine zielspezifische 20-nt-Guide-RNA (gRNA) kodiert, die für maximale Knockout-Effizienz unter Verwendung von Sequenzen aus der GeCKO v2-Bibliothek entwickelt wurde
- gRNA-Sequenzen lenken Cas9 so, dass es ortsspezifische Doppelstrangbrüche (DSBs) im BRDG1-Genomlokus induziert, was zu einem Gen-Knockout durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ) führt
- Die Puromycin-Resistenz- und RFP-Gene werden von LoxP-Stellen flankiert, was die Entfernung der Selektionsmarker mittels Cre-Rekombinase (Cre-Vektor: sc-418923) nach der Etablierung stabiler Knockout-Zelllinien ermöglicht
- Nach der Transfektion kann die Effizienz des Gen-Knockouts per Western Blot oder histologisch mit folgendem Antikörper überprüft werden: BRDG1: sc-398691
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
BRDG1 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m) | sc-425307 | 20 µg | $397.00 |
Übersicht
STAP1 (BRDG1) ist ein Adapterprotein, das in hämatopoetischen und immunologischen Zelllinien exprimiert wird und die intrazelluläre Signalweiterleitung nach Aktivierung von Oberflächenrezeptoren koordiniert. In Mausmodellen wird BRDG1 mit B‑Zellrezeptor-assoziierten Signalwegen und tyrosinkinaseabhängiger Signalübertragung in Verbindung gebracht, wobei es Phosphorylierungskaskaden und transkriptionelle Programme beeinflusst, die Immunaktivierung und Differenzierung steuern. Über Interaktionen, die durch modulare Bindedomänen vermittelt werden, kann BRDG1 die Integration von Signalen, den Aufbau von Proteinkomplexen und nachgeschaltete Genexpressionsprogramme beeinflussen. Eine Fehlregulation adaptervermittelter Signalnetzwerke ist für entzündliche Phänotypen und Mechanismen hämatologischer Erkrankungen relevant, weshalb Stap1 ein geeignetes Ziel ist, um die Robustheit immunologischer Signalwege und das „Rewiring“ von Signalwegen zu untersuchen.
Das BRDG1 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des Stap1-Gens in mouse-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des Stap1-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.
Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von Stap1 nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die BRDG1-Proteinexpression aufheben.
Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von Stap1-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der BRDG1-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.
Hauptmerkmale
- sgRNAs, die auf Stap1-Exone abzielen, die für die BRDG1-Funktion entscheidend sind
Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
Pool von Plasmiden, die auf mehrere Stap1-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion
Designvarianten
CRISPRs +/- HDRs
- gRNAs, die vom BRDG1 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) und vom BRDG1 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des Stap1-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das BRDG1 HDR-Plasmid (m) und BRDG1 HDR-Plasmid (m2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von Stap1-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten Stap1-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.