Not CRISPR data: the image illustrates antibody quality for visualizing CRISPR experiment results.
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BPGM CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h): sc-405810
- Zielspezies: human
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- BPGM Das CRISPR/Cas9-Knockout (KO)-Plasmid (h) ist ein Pool von Plasmiden, von denen jedes für die Cas9-Nuklease und eine zielspezifische 20-nt-Guide-RNA (gRNA) kodiert, die für maximale Knockout-Effizienz unter Verwendung von Sequenzen aus der GeCKO v2-Bibliothek entwickelt wurde
- gRNA-Sequenzen lenken Cas9 so, dass es ortsspezifische Doppelstrangbrüche (DSBs) im BPGM-Genomlokus induziert, was zu einem Gen-Knockout durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ) führt
- Die Puromycin-Resistenz- und RFP-Gene werden von LoxP-Stellen flankiert, was die Entfernung der Selektionsmarker mittels Cre-Rekombinase (Cre-Vektor: sc-418923) nach der Etablierung stabiler Knockout-Zelllinien ermöglicht
- Nach der Transfektion kann die Effizienz des Gen-Knockouts per Western Blot oder histologisch mit folgendem Antikörper überprüft werden: BPGM: sc-373819
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
BPGM CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) | sc-405810 | 20 µg | $397.00 |
Übersicht
Die Bisphosphoglycerat-Mutase (BPGM) ist ein in erythroiden Zellen angereichertes Enzym, das die Spiegel von 2,3‑Bisphosphoglycerat (2,3‑BPG) reguliert, einem zentralen allosterischen Effektor der Sauerstoffaffinität des Hämoglobins. Durch die wechselseitige Umwandlung von 1,3‑Bisphosphoglycerat und 2,3‑BPG verknüpft BPGM den glykolytischen Fluss mit der Physiologie der Sauerstoffabgabe und der metabolischen Homöostase roter Blutkörperchen. Eine veränderte BPGM‑Aktivität kann die 2,3‑BPG‑Konzentrationen verschieben und die Gewebeoxygenierung modulieren, was sie für Studien zum Erythrozytenstoffwechsel, zur Hypoxieanpassung und zu hämatologischen Phänotypen relevant macht. Da 2,3‑BPG die Hämoglobinfunktion beeinflusst, ohne die Hämoglobinmenge zu verändern, wird BPGM häufig eingesetzt, um metabolische Kontrollpunkte zu untersuchen, die die Sauerstoffbindungsdynamik beeinflussen.
Das BPGM CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des BPGM-Gens in human-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des BPGM-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.
Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von BPGM nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die BPGM-Proteinexpression aufheben.
Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von BPGM-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der BPGM-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.
Hauptmerkmale
- sgRNAs, die auf BPGM-Exone abzielen, die für die BPGM-Funktion entscheidend sind
Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
Pool von Plasmiden, die auf mehrere BPGM-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion
Designvarianten
CRISPRs +/- HDRs
- gRNAs, die vom BPGM CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) und vom BPGM CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des BPGM-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das BPGM HDR-Plasmid (h) und BPGM HDR-Plasmid (h2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von BPGM-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten BPGM-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.