BPAG1 CRISPR Activationプラスミド (h): sc-403388-ACT

DSTは、水疱性類天疱瘡抗原1（BPAG1）をコードしており、BPAG1は中間径フィラメントを膜関連複合体に連結する大型の細胞骨格リンカー（サイトリンカー）タンパク質である。これにより、細胞骨格の構築、小胞輸送、ならびに細胞の機械的な耐性が支えられる。ヒトのBPAG1アイソフォームは重層上皮や神経細胞で顕著に発現し、ヘミデスモソームの完全性を維持して細胞—細胞外基質接着の安定化に寄与する。こうした構造的役割を通じて、BPAG1は、アクチン—微小管—中間径フィラメントの協調したクロストークに依存する移動、極性形成、ストレス応答シグナル伝達などの過程に影響を与える。BPAG1の調節異常や抗原性の変化は、水疱形成を伴う皮膚病変や神経変性様の表現型と関連しており、DSTは細胞骨格機能不全や組織脆弱化の機序を研究する上で有用な標的となる。

BPAG1 CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性DSTの発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

BPAG1 CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における DST 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はDST転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性BPAG1の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のDST遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるBPAG1依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびDST発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるBPAG1経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。