Plasmide CRISPR/Cas9 KO BMP-1 (h): sc-402432

Présentation

BMP1 code la protéine morphogénétique osseuse 1 (BMP‑1), une métalloprotéase sécrétée qui agit comme une procollagène C‑protéinase et comme une enzyme clé de maturation de la matrice extracellulaire (MEC). BMP‑1 clive des précurseurs structuraux, notamment les procollagènes et d’autres protéines associées à la MEC, coordonnant la fibrillogenèse du collagène, le remodelage tissulaire et la signalisation cellulaire dépendante de la matrice. Par ses rôles dans l’assemblage et le renouvellement de la MEC, l’activité de BMP‑1 recoupe des voies qui régissent l’adhésion cellulaire, la migration et la mécanotransduction dans les tissus conjonctifs. Une dysrégulation de la fonction de BMP1 a été associée à des affections héréditaires et acquises impliquant un traitement anormal du collagène ainsi que l’intégrité de l’os et des tissus conjonctifs, ce qui en fait une cible pertinente pour les études de biologie de la matrice et du développement squelettique.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO BMP-1 (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène BMP1 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du BMP1, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert BMP1 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine BMP-1.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en BMP1 pour l'étude de la signalisation de BMP-1, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de BMP1 essentiels à la fonction de BMP-1
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de BMP1 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le BMP-1 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le BMP-1 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus BMP1. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le BMP-1 plasmide HDR (h) et le BMP-1 (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie BMP1 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles BMP1 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.