Bmi-1 Particelle di Attivazione Lentivirale (h): sc-417606-LAC

BMI1 codifica Bmi-1, un componente centrale del Polycomb Repressive Complex 1 (PRC1), che impone il silenziamento trascrizionale mediante compattazione della cromatina e monoubiquitinazione dell’istone H2A sulla lisina 119. Bmi-1 regola l’autorinnovamento, l’impegno di linea e la durata replicativa reprimendo programmi chiave del ciclo cellulare e della senescenza, incluso il locus CDKN2A (p16^INK4a/p14^ARF). Attraverso questi meccanismi epigenetici influenza le risposte al danno al DNA, la tolleranza allo stress ossidativo e il mantenimento di cellule staminali/progenitrici. Un’attività deregolata di BMI1 è stata collegata a proliferazione aberrante, stati di differenziamento alterati e programmi trascrizionali associati ai tumori, rendendolo un nodo ampiamente studiato nell’oncogenesi e nella biologia delle cellule staminali tumorali.

Le particelle di attivazione lentivirale Bmi-1 (h) rispondono a questa esigenza incapsulando il sistema completo di attivazione trascrizionale del mediatore di attivazione sinergica (SAM) in particelle lentivirali ad alto titolo pronte per la trasduzione, consentendo un'efficiente sovraregolazione di BMI1 in una gamma più ampia di tipi di cellule umane.

Le particelle di attivazione lentivirale Bmi-1 (h) veicolano tutti i componenti funzionali del sistema del mediatore di attivazione sinergica (SAM) tramite trasduzione lentivirale. Il sistema comprende tre preparati di particelle co-trasdotti nelle cellule bersaglio: uno che codifica per dCas9 cataliticamente inattivo (mutazioni D10A e N863A) fuso al dominio di transattivazione VP64 con un gene di resistenza alla blasticidina; una che codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1 con un gene di resistenza all'igromicina; e una che codifica un sgRNA di 20 nt specifico per il bersaglio fuso a due aptameri di RNA MS2 con un gene di resistenza alla puromicina. A seguito della trasduzione lentivirale e dell'integrazione genomica dei cassetti di espressione, i componenti del SAM vengono espressi in modo stabile e si assemblano nel locus bersaglio all'interno della regione promotrice prossimale a monte del sito di inizio della trascrizione BMI1, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo cooperativo per reclutare il machinery trascrizionale endogeno e guidare una sovraregolazione sostenuta dell'espressione endogena di Bmi-1. L'uso di dCas9 inattivo nei confronti delle nucleasi evita l'introduzione di rotture del DNA a doppio filamento e preserva il locus genomico nativo BMI1 e l'architettura regolatoria.

Il formato lentivirale offre diversi vantaggi pratici: l'integrazione genomica stabile supporta l'attivazione ereditaria attraverso le divisioni cellulari; le preparazioni di particelle ad alto titolo eliminano la necessità di una produzione virale interna; e la compatibilità con tipi di cellule primarie, non in divisione e resistenti alla trasfezione amplia l'accessibilità sperimentale. Il successo della trasduzione può essere confermato e potenziato attraverso una selezione antibiotica tripla utilizzando puromicina, igromicina e blasticidina.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.