BMCP1 Lentiviral Ativação Partículas de ativação de lentivirus (m2): sc-422996-LAC-2

O Slc25a14 de camundongo codifica a proteína carreadora mitocondrial cerebral 1 (BMCP1), um transportador da membrana interna mitocondrial da família SLC25 implicado na regulação do vazamento de prótons e da eficiência do acoplamento mitocondrial. A atividade da BMCP1 influencia a fosforilação oxidativa, o potencial de membrana, a produção de ATP e a homeostase de espécies reativas de oxigênio, moldando assim as respostas de neurônios e de tecidos metabolicamente ativos à demanda energética e ao estresse. Alterações na função de Slc25a14 têm sido estudadas no contexto de disfunção mitocondrial e desequilíbrio redox relevantes para a neurodegeneração e para fenótipos metabólicos. A edição gênica de Slc25a14 em modelos murinos sustenta pesquisas mecanísticas sobre bioenergética mitocondrial, sinalização adaptativa ao estresse e relações genótipo–fenótipo em vias de transportadores mitocondriais.

As Partículas de Ativação Lentivirais BMCP1 (m2) respondem a esta necessidade ao encapsular o sistema completo de ativação transcricional do mediador de ativação sinérgica (SAM) em partículas lentivirais de alto título, prontas para transdução, permitindo uma regulação positiva eficiente de Slc25a14 numa gama mais ampla de tipos de células humanas.

As Partículas de Ativação Lentivirais BMCP1 (m2) fornecem todos os componentes funcionais do sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) através da transdução lentiviral. O sistema compreende três preparações de partículas co-transduzidas em células-alvo: uma que codifica dCas9 cataliticamente inativo (mutações D10A e N863A) fundido ao domínio de transativação VP64 com um gene de resistência à blasticidina; uma que codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1 com um gene de resistência à higromicina; e uma que codifica um sgRNA de 20 nt específico do alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 com um gene de resistência à puromicina. Após a transdução lentiviral e a integração genómica das cassetes de expressão, os componentes do SAM são expressos de forma estável e reúnem-se no locus-alvo dentro da região promotora proximal a montante do local de início da transcrição Slc25a14, onde VP64, p65 e HSF1 atuam cooperativamente para recrutar a maquinaria transcricional endógena e impulsionar a regulação positiva sustentada da expressão endógena de BMCP1. A utilização de dCas9 inativo em termos de nuclease evita a introdução de quebras de DNA de cadeia dupla e preserva o locus genómico nativo Slc25a14 e a arquitetura reguladora.

O formato lentiviral oferece várias vantagens práticas: a integração genómica estável suporta a ativação hereditária ao longo das divisões celulares; as preparações de partículas de alto título eliminam a necessidade de produção viral interna; e a compatibilidade com tipos de células primárias, não divisíveis e resistentes à transfecção amplia a acessibilidade experimental. A transdução bem-sucedida pode ser confirmada e enriquecida através de seleção tripla com antibióticos utilizando puromicina, higromicina e blasticidina.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.