BGT-1 Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (m): sc-420468
- alvos específicos: mouse
- 20 µg de plasmídeo de DNA pronto para transfecção; Suficiente para até 20 transfecções
- BGT-1 O Plasmídeo CRISPR/Cas9 Knockout (KO) (m) é um conjunto de plasmídeos, cada um codificando a nuclease Cas9 e um RNA guia (gRNA) de 20 nt específico para o alvo, concebido para uma eficiência máxima de knockout utilizando sequências derivadas da biblioteca GeCKO v2
- As sequências de gRNA direcionam a Cas9 para induzir quebras de cadeia dupla (DSBs) específicas do local no locus genómico BGT-1, resultando no knockout do gene através da junção de extremidades não homólogas (NHEJ)
- Os genes de resistência à puromicina e RFP são flanqueados por sítios LoxP, permitindo a remoção de marcadores de seleção através da recombinase Cre (Cre Vector: sc-418923) após o estabelecimento de linhas celulares knockout estáveis
- Após a transfecção, a eficácia do processo de nocaute genético por ser testada WB, IF ou IHC usando o anticorpo:BGT-1 Anticorpo (D-5): sc-514024
Informacoes sobre ordens
| Nome do Produto | Numero de Catalogo | UNID | Preco | Qde | FAVORITOS | |
BGT-1 Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (m) | sc-420468 | 20 µg | $397.00 |
Visão geral
Slc6a12 codifica o transportador de betaína/GABA BGT-1 (SLC6A12), um membro da família SLC6 de transportadores de neurotransmissores dependente de Na⁺/Cl⁻, que medeia a captação celular do osmólito betaína e pode transportar GABA em contextos específicos. O BGT-1 contribui para a adaptação ao estresse osmótico e para a regulação do volume celular ao favorecer o acúmulo intracelular de osmólitos orgânicos, conectando o transporte de membrana a programas osmoprotetores e à homeostase metabólica. Em tecidos de camundongo, a expressão de Slc6a12 tem sido estudada em epitélios renais e no sistema nervoso, onde alterações na atividade do transportador podem influenciar o tônus inibitório e a sinalização responsiva ao estresse. A desregulação do manejo de osmólitos e do equilíbrio GABAérgico é relevante em modelos de lesão osmótica renal, neuroinflamação e suscetibilidade a convulsões, tornando Slc6a12 um alvo útil para estudos mecanísticos de vias biológicas.
O Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO BGT-1 (m) é um conjunto de plasmídeos concebido para a interrupção direcionada do gene Slc6a12 em linhas celulares mouse. Cada plasmídeo coexpressa um RNA guia único (sgRNA) direcionado a um local distinto dentro do Slc6a12, juntamente com a nuclease Cas9 de Streptococcus pyogenes. Os plasmídeos também codificam GFP, permitindo a identificação fluorescente e o enriquecimento de células transfectadas com sucesso por microscopia de fluorescência ou citometria de fluxo.
O design multiguia aumenta a probabilidade de gerar inserções ou deleções (indels) que interrompem o quadro de leitura aberto do Slc6a12 na sequência da formação de quebras de cadeia dupla mediadas por Cas9. As quebras de ADN introduzidas pelo sistema CRISPR/Cas9 são reparadas através de vias endógenas de junção de extremidades não homólogas (NHEJ), resultando frequentemente em mutações de deslocamento de quadro que abolir a expressão da proteína BGT-1.
Este sistema de knockout CRISPR permite a geração eficiente de modelos celulares com deficiência de Slc6a12 para a investigação da sinalização de BGT-1, estudos de genómica funcional, investigação em biologia do cancro e avaliação de respostas terapêuticas em linhas celulares humanas.
Características principais
- sgRNAs direcionados para o(s) exão(ões) Slc6a12 críticos para a função BGT-1
Coexpressão de SpCas9 e sgRNA a partir de um único plasmídeo para simplificar a administração
Repórter GFP para identificação de células transfectadas
Conjunto de plasmídeos direcionados para múltiplos locais genómicos Slc6a12 para melhorar a eficiência do knockout
Compatível com administração por transfecção
Variantes de Design
CRISPRs +/- HDRs
- Os gRNAs codificados pelo BGT-1 Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (m) e pelo BGT-1 Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (m2) têm como alvo locais distintos dentro do locus Slc6a12. Pode estar disponível um ou ambos os designs de alvo. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.
As construções doadoras HDR codificadas pelo BGT-1 Plasmídeo HDR (m) e o Plasmídeo HDR BGT-1 (m2) contêm uma cassete de resistência à puromicina e um repórter RFP flanqueado por braços de homologia Slc6a12 para suportar a reparação dirigida por homologia em locais-alvo Slc6a12 definidos, correspondentes aos desenhos de KO CRISPR/Cas9. A disponibilidade do doador HDR pode variar. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.
Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.