BGT-1 Plásmido CRISPR/Cas9 KO (m): sc-420468

Descripción general

Slc6a12 codifica el transportador de betaína/GABA BGT-1 (SLC6A12), un miembro dependiente de Na⁺/Cl⁻ de la familia de transportadores de neurotransmisores SLC6 que media la captación celular del osmólito betaína y puede transportar GABA en contextos específicos. BGT-1 contribuye a la adaptación al estrés osmótico y a la regulación del volumen celular al favorecer la acumulación intracelular de osmólitos orgánicos, vinculando el transporte de membrana con programas osmoprotectores y la homeostasis metabólica. En tejidos de ratón, la expresión de Slc6a12 se ha estudiado en epitelios renales y en el sistema nervioso, donde una actividad alterada del transportador puede influir en el tono inhibidor y en la señalización sensible al estrés. La desregulación del manejo de osmólitos y del equilibrio GABAérgico es relevante en modelos de lesión osmótica renal, neuroinflamación y susceptibilidad a convulsiones, lo que convierte a Slc6a12 en una diana útil para estudios mecanísticos de vías.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO BGT-1 (m) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen Slc6a12 en líneas celulares mouse. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del Slc6a12 junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de Slc6a12 tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína BGT-1.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en Slc6a12 para la investigación de la señalización de BGT-1, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de Slc6a12 críticos para la función de BGT-1
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de Slc6a12 para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido BGT-1 CRISPR/Cas9 KO (m) y el plásmido BGT-1 CRISPR/Cas9 KO (m2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus Slc6a12. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR BGT-1 (m) y el plásmido HDR BGT-1 (m2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología Slc6a12 para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana Slc6a12 definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.