BBS8 CRISPR Activationプラスミド (h): sc-404755-ACT

TTC8はBBS8をコードしており、BBS8は一次繊毛への／一次繊毛からのカーゴ輸送を調整するBBSome複合体の中核構成要素です。これにより、繊毛膜タンパク質のソーティングや、鞭毛内輸送（IFT）に連動した過程が支えられます。Sonic hedgehogシグナルやGPCR輸送など、繊毛依存的なシグナル伝達の制御を通じて、BBS8は複数組織にわたり細胞極性と感覚シグナル伝達の維持に寄与します。BBS8の遺伝学的破綻または機能不全は、バルデー・ビードル症候群および関連する繊毛病（ciliopathy）と関連し、繊毛構造とシグナル伝達の障害と整合する多面的（多系統）な表現型を示します。ヒト細胞モデルでは、TTC8発現を攪乱することにより、繊毛プロテオスタシス、小胞輸送、ならびに繊毛シグナルの変化下流での経路再配線を研究するための扱いやすいアプローチが得られます。

BBS8 CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性TTC8の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

BBS8 CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における TTC8 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はTTC8転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性BBS8の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のTTC8遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるBBS8依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびTTC8発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるBBS8経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。