BBS4 CRISPR/Cas9 KOプラスミド (h): sc-403421

概要

BBS4は、一次繊毛の形成および繊毛膜タンパク質の輸送を制御するために、鞭毛内輸送（IFT）機構と協調して働くBBSome複合体の中核構成要素をコードします。繊毛シグナル伝達能における役割を通じて、BBS4は、正常な繊毛形成と選択的なカーゴ配送に依存するHedgehog経路やその他の受容体介在性プログラムなどの経路に影響を与えます。BBS4の機能が破綻すると、中心体／基底小体の機能が障害され、繊毛構造が損なわれ、細胞の細胞外刺激に対する応答が変化します。BBS4のバリアントはバルデー・ビードル症候群および関連する繊毛病と関連しており、繊毛機能不全が発生および代謝表現型に結び付く機序を研究する上で重要です。

BBS4 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）は、human細胞株におけるBBS4遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、BBS4内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、BBS4のオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、BBS4タンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、BBS4シグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、BBS4欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• BBS4の機能に不可欠なBBS4エクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、BBS4ゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• BBS4 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）およびBBS4 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h2）によってコードされるgRNAは、BBS4遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  BBS4 HDRプラスミド（h）および BBS4 HDRプラスミド（h2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはBBS4ホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のBBS4標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。