BBS10 Double Nickaseプラスミド (h): sc-408538-NIC
- 対象生物種: human
- 20 µg のトランスフェクション準備済み、精製したプラスミドDNA、～20回トランスフェクション
- BBS10 Double Nickaseプラスミド (h)はペアのプラスミドを含みます。それぞれのプラスミドはD10A変異したCas9 nuclease、及びCRISPR/Cas9 KOの対応よりも高い特異性で遺伝子発現をノックアウトするように設計された標的特異的な20 ntガイドRNA (gRNA)をコードします。
- ペアリングしたガイドRNAは、約20 bpでずらすことにより、ゲノムDNAの特定Cas9媒介のdouble nickingを可能にし、DSBを模造します。
- ペアの1つのプラスミドは選択用のピューロマイシン耐性遺伝子を含みます；ペアのほかの1つのプラスミドは、視覚的にトランスフェクションを確認するGFPマーカーを含みます。
- BBS10ダブルニカースプラスミド（h）およびBBS10ダブルニカースプラスミド（h2）は、BBS10を標的とする異なるペアのgRNA設計をコードしています。いずれか一方、あるいは両方のデザインが利用可能である場合があります
- トランスフェクションの後、遺伝子ノックアウト効果は、抗体を用いたWB、IFまたはIHCによって検定されることができます: BBS10 抗体 (A-3): sc-518239
注文情報
| 製品名 | カタログ # | 単位 | 価格 | 数量 | お気に入り | |
BBS10 Double Nickaseプラスミド (h) | sc-408538-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
BBS10 Double Nickaseプラスミド (h2) | sc-408538-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
BBS10は、線毛形成（ciliogenesis）および線毛膜タンパク質の組み立て／輸送を支えるために、BBSome／シャペロニン複合体内で機能するシャペロニン様タンパク質をコードしている。一次線毛の形成や、鞭毛内輸送（IFT）関連プロセスにおける役割を通じて、BBS10はHedgehogをはじめ、細胞極性・増殖・分化を統合的に制御する他の感覚経路を含む、線毛依存的なシグナル伝達ネットワークに影響を与える。BBS10の機能障害は線毛構造および受容体輸送を損ない、線毛病（ciliopathy）に特徴的な多面的（多臓器性）表現型との関連が示されている。そのためヒトBBS10は、Bardet–Biedl症候群や関連する線毛関連疾患のモデルにおいて、器官発生、代謝、感覚機能の機序を解明する目的で広く研究されている。
BBS10 ダブルニカースプラスミド（h）は、human 細胞株における BBS10 座の高特異性編集のために設計された、対となる2つのプラスミドから構成される。各プラスミドは、Cas9 D10Aニカースと、BBS10内の対向するDNA鎖を標的とする異なるsgRNAを発現する。対向するDNA鎖上の隣接する部位に誘導されると、2つのニカースはオフセットした一本鎖切断を生成し、これらが組み合わさってずれた二本鎖切断を生じさせる。これにより、両方のガイドによる協調的なオンターゲット活性が必要となる。生じたDNA切断は、細胞内の内在性修復経路、特に非相同末端結合（NHEJ）によって修復され、その結果、BBS10の機能を阻害する挿入または欠失が生じる。標的座標における2つのsgRNAの結合を必要とするこの二重ニッキング法は、編集の特異性を高め、標的精度に対するさらなる制御が求められる用途において、CRISPR戦略を補完するものである。
編集された細胞を効率的に同定するために、1つのプラスミドはトランスフェクトされた細胞集団を蛍光可視化するためのGFPをコードし、もう1つのプラスミドは抗生物質選別用のプロマイシン耐性遺伝子を保有しています。これらの機能により、共トランスフェクトされた細胞集団の効率的な濃縮が可能となり、BBS10が破壊されたクローンの検証が簡素化されます。
研究用のみ。診断用または治療用ではありません。