BBS10 Double Nickase Plasmid (h): sc-408538-NIC
- Zielspezies: human
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das BBS10 Double Nickase Plasmid (h) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- BBS10 Double-Nickase-Plasmid (h) und BBS10 Double-Nickase-Plasmid (h2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf BBS10 abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
- Nach der Transfektion kann die Effizienz des Gen-Knockouts per Western Blot oder histologisch mit folgendem Antikörper überprüft werden: BBS10: sc-518239
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
BBS10 Double Nickase Plasmid (h) | sc-408538-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
BBS10 Double Nickase Plasmid (h2) | sc-408538-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
BBS10 kodiert ein chaperoninähnliches Protein, das innerhalb des BBSome/Chaperonin-Komplexes wirkt und so die Ziliogenese sowie die Assemblierung und den Transport von Membranproteinen der Zilien unterstützt. Über seine Rolle bei der Bildung des primären Ziliums und bei prozessen, die mit dem intraflagellären Transport zusammenhängen, beeinflusst BBS10 zilienabhängige Signalnetzwerke, darunter Hedgehog und andere sensorische Signalwege, die Zellpolarität, Proliferation und Differenzierung koordinieren. Eine Störung von BBS10 beeinträchtigt die Zilienstruktur und den Rezeptortransport und wird dadurch mit pleiotropen Phänotypen in Verbindung gebracht, wie sie für Ziliopathien charakteristisch sind. Das humane BBS10 wird daher in Modellen des Bardet-Biedl-Syndroms und verwandter, zilienassoziierter Erkrankungen breit untersucht, um Mechanismen der Organentwicklung, des Stoffwechsels und der Sinnesfunktion aufzuklären.
BBS10 Das Double-Nickase-Plasmid (h) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des BBS10-Lokus in human-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von BBS10 abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die BBS10-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit BBS10-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.