BAI-1 CRISPR Activationプラスミド (m): sc-430764-ACT

マウスのAdgrb1は、脳特異的血管新生阻害因子1（BAI-1）をコードしている。BAI-1は、神経系および血管関連微小環境に豊富に存在する接着型GPCRである。BAI-1は細胞―細胞間および細胞―マトリックス間の相互作用に関与し、ホスファチジルセリン依存的な貪食を介してアポトーシス細胞の認識を促進し、RhoファミリーGTPアーゼシグナル伝達を通じて細胞骨格リモデリングを調節する。さらに、プロテアーゼによるプロセシングによって抗血管新生作用をもつ断片が放出されることがあり、BAI-1が血管成長および組織恒常性の制御に関与することと結び付けられている。BAI-1の発現や機能の変化は、神経炎症、シナプス構造の組織化、腫瘍微小環境の生物学、ならびに異常血管新生に関連する経路への関与が示唆されており、中枢神経系（CNS）および血管表現型の機構解析に有用なノードとなる。

BAI-1 CRISPR活性化プラスミド（m）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性Adgrb1の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

BAI-1 CRISPR 活性化プラスミド (m) は、ヒト細胞株における Adgrb1 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はAdgrb1転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性BAI-1の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のAdgrb1遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるBAI-1依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびAdgrb1発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるBAI-1経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。