BACE2 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h): sc-403147

Übersicht

BACE2 (beta-site APP cleaving enzyme 2) ist eine Typ-I-Transmembran-Aspartylprotease aus der Pepsin-Familie, die in sekretorischen und endozytischen Kompartimenten lokalisiert ist und zur regulierten Proteolyse von Membranproteinen beiträgt. Sie ist an Signalwegen beteiligt, die mit der Prozessierung des Amyloid-Vorläuferproteins sowie mit der allgemeinen Proteostase im Golgi–Endosom–Lysosom-System verknüpft sind, und beeinflusst dabei den Transport und den Abbau von Substratproteinen. Die Aktivität von BACE2 wurde im Kontext der Neurobiologie und der metabolischen Regulation untersucht, einschließlich der Funktion der Pankreasinseln und entzündlicher Signalnetzwerke. Eine dysregulierte BACE2-Expression oder Proteaseaktivität wurde mit krankheitsrelevanten Phänotypen bei Neurodegeneration und krebsbezogenen zellulären Verhaltensweisen in Verbindung gebracht, was ihren Einsatz als mechanistisches Ziel in der funktionellen Genomik unterstützt.

Das BACE2 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des BACE2-Gens in human-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des BACE2-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von BACE2 nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die BACE2-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von BACE2-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der BACE2-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf BACE2-Exone abzielen, die für die BACE2-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere BACE2-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom BACE2 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) und vom BACE2 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des BACE2-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das BACE2 HDR-Plasmid (h) und BACE2 HDR-Plasmid (h2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von BACE2-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten BACE2-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.