BACE CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2): sc-401500-KO-2

Übersicht

BACE1 kodiert die Beta‑Site‑Amyloid‑Precursor‑Protein‑spaltende Enzym 1 (BACE), eine Aspartylprotease, die die amyloidogene Verarbeitung von APP einleitet, indem sie das N‑Terminus der Aβ‑Peptide erzeugt. Diese Aktivität steht in Wechselwirkung mit dem endosomalen Transport und der lysosomalen Proteostase, wobei saure Kompartimente die Reifung von BACE und die Substratspaltung begünstigen. Die BACE1‑abhängige Prozessierung beeinflusst die synaptische Funktion und neuronale Signalübertragung, indem sie die Spiegel von APP‑abgeleiteten Fragmenten und weiteren neuronalen Substraten moduliert. Eine dysregulierte BACE1‑Expression oder ‑Aktivität wird mit der Alzheimer‑assoziierten molekularen Pathologie in Verbindung gebracht und häufig im Kontext der Amyloid‑Signalweg‑Biologie und von Mechanismen der Neurodegeneration untersucht.

Das BACE CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h2) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des BACE1-Gens in human-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des BACE1-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von BACE1 nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die BACE-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von BACE1-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der BACE-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf BACE1-Exone abzielen, die für die BACE-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere BACE1-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom BACE CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) und vom BACE CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des BACE1-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das BACE HDR-Plasmid (h) und BACE HDR-Plasmid (h2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von BACE1-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten BACE1-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.