B7-H4 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h): sc-416865

Übersicht

VTCN1 kodiert B7-H4 (V-set domain containing T cell activation inhibitor 1), einen Immune-Checkpoint-Liganden der B7-Familie, der die Proliferation von T-Zellen sowie die Zytokinproduktion unterdrückt und damit zur peripheren Immunregulation beiträgt. B7-H4 wird in myeloiden und epithelialen Kontexten induziert und beeinflusst die Antigenpräsentation, inflammatorische Signalwege sowie Programme der Immunflucht innerhalb des Tumormikromilieus. Eine dysregulierte VTCN1-Expression wurde in mehreren soliden Tumoren beschrieben und ist mit einer verminderten antitumoralen Immunaktivität assoziiert; zugleich überschneidet sie sich mit Signalwegen, die die Polarisierung von Makrophagen und die Aktivierungsschwellen von T-Zellen steuern. Diese Eigenschaften machen VTCN1 zu einem nützlichen Ziel, um inhibitorische Ko-Signalisierungsnetzwerke und immunregulatorische Mechanismen zu untersuchen, die für Krebs- und Modelle chronischer Entzündung relevant sind.

Das B7-H4 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des VTCN1-Gens in human-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des VTCN1-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von VTCN1 nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die B7-H4-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von VTCN1-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der B7-H4-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf VTCN1-Exone abzielen, die für die B7-H4-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere VTCN1-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom B7-H4 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) und vom B7-H4 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des VTCN1-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das B7-H4 HDR-Plasmid (h) und B7-H4 HDR-Plasmid (h2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von VTCN1-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten VTCN1-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.