Not CRISPR data: the image illustrates antibody quality for visualizing CRISPR experiment results.
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B7-2 Double Nickase Plasmid (m): sc-419575-NIC
- Zielspezies: mouse
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das B7-2 Double Nickase Plasmid (m) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- B7-2 Double-Nickase-Plasmid (m) und B7-2 Double-Nickase-Plasmid (m2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf Cd86 abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
- Nach der Transfektion kann die Effizienz des Gen-Knockouts per Western Blot oder histologisch mit folgendem Antikörper überprüft werden: B7-2: sc-28347
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
B7-2 Double Nickase Plasmid (m) | sc-419575-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
B7-2 Double Nickase Plasmid (m2) | sc-419575-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
Das murine Cd86-Gen kodiert den kostimulatorischen Rezeptor B7-2 (CD86), ein Typ‑I‑Membran-Glykoprotein, das vor allem auf antigenpräsentierenden Zellen wie dendritischen Zellen, Makrophagen und B‑Zellen exprimiert wird. Durch die Bindung an CD28 und CTLA‑4 auf T‑Zellen verknüpft B7‑2 die angeborene Immunerkennung mit Aktivierung und Toleranz der adaptiven Immunantwort und beeinflusst dabei die IL‑2‑Produktion, die Proliferation von T‑Zellen sowie deren Differenzierung. Die Cd86-Expression wird durch entzündliche Signale, darunter TLR/NF‑κB‑Signalwege, induziert und trägt in lymphatischen Geweben zur Stärke und Qualität antigengetriebener Antworten bei. Eine fehlregulierte CD86‑vermittelte Kostimulation ist an Mechanismen autoimmuner und entzündlicher Erkrankungen beteiligt und wird in Modellen der Transplantatabstoßung, von Allergien und Tumor‑Immun‑Interaktionen umfassend untersucht.
B7-2 Das Double-Nickase-Plasmid (m) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des Cd86-Lokus in mouse-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von Cd86 abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die Cd86-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit Cd86-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.