ATP7B CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m): sc-419260

Übersicht

Das murine Gen **Atp7b** kodiert **ATP7B**, einen kupfertransportierenden **P‑Typ‑ATPase‑Transporter**, der die intrazelluläre Kupferverteilung reguliert, indem er in Abhängigkeit von der Kupferbelastung zwischen dem **trans‑Golgi‑Netzwerk** und vesikulären Kompartimenten pendelt. ATP7B unterstützt die Reifung kupferhaltiger Enzyme im sekretorischen Weg und vermittelt die Sequestrierung und den Export von Kupfer; dabei ist es in die zelluläre Metallhomöostase und Antworten auf oxidativen Stress eingebunden. Eine Störung der ATP7B‑abhängigen Kupferhandhabung bringt das Redoxgleichgewicht, den Proteintransport und die mitochondriale Funktion aus dem Lot, wodurch **Atp7b** einen zentralen Knotenpunkt für die Untersuchung des Kupferstoffwechsels und verwandter Pathophysiologie darstellt. In Mäusen wird **Atp7b** häufig genutzt, um genetische Phänotypen einer Kupferüberladung zu modellieren und hepatische sowie neurologische Mechanismen zu untersuchen, die mit einer Metall‑Dysregulation verknüpft sind.

Das ATP7B CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des Atp7b-Gens in mouse-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des Atp7b-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von Atp7b nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die ATP7B-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von Atp7b-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der ATP7B-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf Atp7b-Exone abzielen, die für die ATP7B-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere Atp7b-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom ATP7B CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) und vom ATP7B CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des Atp7b-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das ATP7B HDR-Plasmid (m) und ATP7B HDR-Plasmid (m2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von Atp7b-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten Atp7b-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.