ATP-citrate synthase CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m): sc-430516

Übersicht

Das Mausgen *Acly* kodiert die ATP-Citrat-Synthase (ACLY), ein zytosolisches Enzym, das Citrat und CoA in Acetyl‑CoA und Oxalacetat umwandelt und damit den mitochondrialen Kohlenstofffluss mit dem zytoplasmatischen Stoffwechsel verknüpft. Durch die Bereitstellung von Acetyl‑CoA für die de‑novo‑Synthese von Fettsäuren und Cholesterin unterstützt ACLY die Lipogenese und Membranbiogenese; außerdem trägt es zu Acetyl‑CoA‑Pools bei, die für die Protein- und Histonacetylierung genutzt werden. Diese Aktivität integriert die Nährstoffsensorik mit Signalwegen, die die Kopplung von Glykolyse und TCA‑Zyklus, die Lipidhomöostase und die epigenetische Regulation der Genexpression steuern. Eine fehlregulierte, ACLY‑abhängige Acetyl‑CoA‑Produktion wurde in krankheitsrelevanten Modellen mit veränderter metabolischer Umprogrammierung, inflammatorischer Signalübertragung und proliferationsassoziierten Phänotypen in Verbindung gebracht.

Das ATP-citrate synthase CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des Acly-Gens in mouse-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des Acly-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von Acly nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die ATP-citrate synthase-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von Acly-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der ATP-citrate synthase-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf Acly-Exone abzielen, die für die ATP-citrate synthase-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere Acly-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom ATP-citrate synthase CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) und vom ATP-citrate synthase CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des Acly-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das ATP-citrate synthase HDR-Plasmid (m) und ATP-citrate synthase HDR-Plasmid (m2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von Acly-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten Acly-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.