ATP-citrate synthase CRISPR/Cas9 KOプラスミド (m): sc-430516

概要

マウスのAclyはATPクエン酸リアーゼ（ACLY）をコードしており、クエン酸とCoAからアセチルCoAとオキサロ酢酸を生成する細胞質酵素である。これにより、ミトコンドリアの炭素フラックスを細胞質の代謝と結び付けている。ACLYは、de novo脂肪酸合成およびコレステロール合成に必要なアセチルCoAを供給することで脂質新生や膜生合成を支えるほか、タンパク質やヒストンのアセチル化に利用されるアセチルCoAプールにも寄与する。この活性は、栄養状態の感知を、解糖系—TCA回路の連関、脂質恒常性、ならびに遺伝子発現のエピジェネティック制御を司る経路と統合する。ACLY依存的なアセチルCoA産生の破綻は、疾患関連モデルにおいて、代謝リモデリングの変化、炎症性シグナル伝達、増殖に関連する表現型と関連付けられている。

ATP-citrate synthase CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）は、mouse細胞株におけるAcly遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、Acly内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、Aclyのオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、ATP-citrate synthaseタンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、ATP-citrate synthaseシグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、Acly欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• ATP-citrate synthaseの機能に不可欠なAclyエクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、Aclyゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• ATP-citrate synthase CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）およびATP-citrate synthase CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m2）によってコードされるgRNAは、Acly遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  ATP-citrate synthase HDRプラスミド（m）および ATP-citrate synthase HDRプラスミド（m2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはAclyホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のAcly標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。