ATIII Double Nickaseプラスミド (m): sc-419222-NIC

Serpinc1 はアンチトロンビンIII（ATIII）をコードする。ATIII は分泌型のセリンプロテアーゼ阻害因子で、トロンビンおよび第Xa因子を不活化することで凝固を抑制し、その活性はヘパラン硫酸やヘパリンによって強く増強される。マウスでは、ATIII は血管恒常性に寄与し、プロテアーゼ駆動性経路の制御を介して、凝固を炎症性シグナル伝達や内皮機能に結び付ける。ATIII 活性の破綻は過凝固表現型や血栓形成感受性と関連するため、Serpinc1 は止血機構と血栓炎症性クロストークを研究するうえで重要な遺伝子である。さらに、ATIII は主として肝細胞で産生され、血漿糖タンパク質として循環することから、Serpinc1 は肝臓での合成・分泌経路の観点からも関連が深い。

ATIII ダブルニカースプラスミド（m）は、mouse 細胞株における Serpinc1 座の高特異性編集のために設計された、対となる2つのプラスミドから構成される。各プラスミドは、Cas9 D10Aニカースと、Serpinc1内の対向するDNA鎖を標的とする異なるsgRNAを発現する。対向するDNA鎖上の隣接する部位に誘導されると、2つのニカースはオフセットした一本鎖切断を生成し、これらが組み合わさってずれた二本鎖切断を生じさせる。これにより、両方のガイドによる協調的なオンターゲット活性が必要となる。生じたDNA切断は、細胞内の内在性修復経路、特に非相同末端結合（NHEJ）によって修復され、その結果、Serpinc1の機能を阻害する挿入または欠失が生じる。標的座標における2つのsgRNAの結合を必要とするこの二重ニッキング法は、編集の特異性を高め、標的精度に対するさらなる制御が求められる用途において、CRISPR戦略を補完するものである。

編集された細胞を効率的に同定するために、1つのプラスミドはトランスフェクトされた細胞集団を蛍光可視化するためのGFPをコードし、もう1つのプラスミドは抗生物質選別用のプロマイシン耐性遺伝子を保有しています。これらの機能により、共トランスフェクトされた細胞集団の効率的な濃縮が可能となり、Serpinc1が破壊されたクローンの検証が簡素化されます。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。