Aspartoacylase Double Nickaseプラスミド (h): sc-405771-NIC

ヒトのASPAは、亜鉛依存性加水分解酵素であるアスパルトアシラーゼをコードしており、N-アセチル-L-アスパラギン酸（NAA）を脱アセチル化して酢酸とL-アスパラギン酸を生成する。これにより、中枢神経系における脂質合成のための炭素フラックスや、ニューロン—グリア間の代謝カップリングが支えられる。NAAの代謝回転を制御することで、ASPAは髄鞘関連プロセスや、膜の生合成やタンパク質アセチル化などアセチルCoA依存性経路に利用される酢酸の供給にも寄与する。ASPAの機能喪失変異は、NAAの異常蓄積と髄鞘形成不全を特徴とする白質ジストロフィーであるカナバン病と関連しており、ASPAは神経発達期の代謝やグリア生物学を研究する上で重要な標的となっている。ASPAの摂動モデルは、代謝物恒常性、オリゴデンドロサイト機能、ならびに下流の転写応答やバイオエネルギー適応を解析する目的で頻繁に用いられる。

Aspartoacylase ダブルニカースプラスミド（h）は、human 細胞株における ASPA 座の高特異性編集のために設計された、対となる2つのプラスミドから構成される。各プラスミドは、Cas9 D10Aニカースと、ASPA内の対向するDNA鎖を標的とする異なるsgRNAを発現する。対向するDNA鎖上の隣接する部位に誘導されると、2つのニカースはオフセットした一本鎖切断を生成し、これらが組み合わさってずれた二本鎖切断を生じさせる。これにより、両方のガイドによる協調的なオンターゲット活性が必要となる。生じたDNA切断は、細胞内の内在性修復経路、特に非相同末端結合（NHEJ）によって修復され、その結果、ASPAの機能を阻害する挿入または欠失が生じる。標的座標における2つのsgRNAの結合を必要とするこの二重ニッキング法は、編集の特異性を高め、標的精度に対するさらなる制御が求められる用途において、CRISPR戦略を補完するものである。

編集された細胞を効率的に同定するために、1つのプラスミドはトランスフェクトされた細胞集団を蛍光可視化するためのGFPをコードし、もう1つのプラスミドは抗生物質選別用のプロマイシン耐性遺伝子を保有しています。これらの機能により、共トランスフェクトされた細胞集団の効率的な濃縮が可能となり、ASPAが破壊されたクローンの検証が簡素化されます。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。