ASIC1 Plásmido CRISPR/Cas9 KO (h): sc-401452

Descripción general

ASIC1 (subunidad 1 del canal iónico sensible a ácidos) codifica un canal catiónico de la familia DEG/ENaC, activado por protones e insensible al voltaje, que se abre en respuesta a la acidificación extracelular para permitir la entrada de Na⁺ y modular la excitabilidad de la membrana. ASIC1 contribuye a la transmisión sináptica, la plasticidad neuronal y la señalización dependiente del pH, integrándose con vías dependientes de Ca²⁺ y con programas génicos regulados por la actividad en células excitables. La alteración de la actividad de ASIC1 se ha relacionado con la neuroinflamación y con respuestas de estrés excitotóxico asociadas a contextos isquémicos y neurodegenerativos, y también se estudia en el procesamiento sensorial relacionado con el dolor. Estas características convierten a ASIC1 humano en una diana útil para desentrañar mecanismos de detección de ácido, homeostasis iónica y redes de señalización acopladas a estímulos.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO ASIC1 (h) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen ASIC1 en líneas celulares human. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del ASIC1 junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de ASIC1 tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína ASIC1.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en ASIC1 para la investigación de la señalización de ASIC1, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de ASIC1 críticos para la función de ASIC1
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de ASIC1 para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido ASIC1 CRISPR/Cas9 KO (h) y el plásmido ASIC1 CRISPR/Cas9 KO (h2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus ASIC1. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR ASIC1 (h) y el plásmido HDR ASIC1 (h2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología ASIC1 para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana ASIC1 definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.