Arrestin-C CRISPR Activationプラスミド (h): sc-403284-ACT

ARR3はアレスチンCをコードしており、アレスチンCは錐体視細胞に豊富に発現するアレスチンである。光によって活性化され、リン酸化されたオプシンに結合することでGタンパク質シグナル伝達を終結させ、光受容（フォトトランスダクション）カスケードにおける受容体の脱感作を促進する。GPCRの不活性化および受容体トラフィッキングを制御することにより、アレスチンCは網膜錐体におけるシグナル振幅と回復速度（回復動態）を形成し、視覚の順応を支える。錐体のGPCRシグナル伝達やアレスチンによるシャットオフの破綻は網膜機能障害と関連づけられており、そのためARR3はGPCRとアレスチンの相互作用および錐体特異的なシグナル制御を研究するための有用な分子学的入口となる。ARR3はまた、繊毛／外節の生物学や感覚ニューロンのシグナル伝達におけるアレスチン依存的過程を解析するうえで扱いやすいモデルも提供する。

Arrestin-C CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性ARR3の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

Arrestin-C CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における ARR3 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はARR3転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性Arrestin-Cの発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のARR3遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるArrestin-C依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびARR3発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるArrestin-C経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。