Partículas Lentivirales de Activación (h) ARRDC4: sc-406413-LAC

ARRDC4 (dominio de arrestina que contiene 4) codifica una proteína adaptadora de la familia de las α-arrestinas implicada en la regulación del tráfico de proteínas de membrana y la atenuación de señales mediante interacciones con ligasas de ubiquitina y la maquinaria endocítica. Responde a señales de estrés celular y a estados metabólicos, conectando la detección de nutrientes con la modulación del recambio de receptores y de las vías de señalización posteriores que influyen en la homeostasis energética. ARRDC4 se ha estudiado en contextos que incluyen tejidos sensibles a la insulina y la biología de los adipocitos, donde una expresión alterada puede reconfigurar el manejo de la glucosa y los programas de metabolismo lipídico. Por lo tanto, la actividad o expresión desregulada de ARRDC4 es relevante para estudios mecanísticos de disfunción metabólica y reconfiguración de vías en modelos de enfermedades cardiometabólicas e inflamatorias.

Las partículas de activación lentiviral ARRDC4 (h) responden a esta necesidad al empaquetar el sistema completo de activación transcripcional del mediador de activación sinérgica (SAM) en partículas lentivirales de alto título listas para la transducción, lo que permite una regulación al alza eficiente de ARRDC4 en una gama más amplia de tipos de células humanas.

Las partículas de activación lentiviral ARRDC4 (h) suministran todos los componentes funcionales del sistema mediador de activación sinérgica (SAM) a través de la transducción lentiviral. El sistema comprende tres preparaciones de partículas cotransducidas en las células diana: una que codifica dCas9 catalíticamente inactivo (mutaciones D10A y N863A) fusionado al dominio de transactivación VP64 con un gen de resistencia a la blasticidina; otra que codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1 con un gen de resistencia a la higromicina; y otra que codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 con un gen de resistencia a la puromicina. Tras la transducción lentiviral y la integración genómica de los casetes de expresión, los componentes del SAM se expresan de forma estable y se ensamblan en el locus diana dentro de la región promotora proximal, aguas arriba del sitio de inicio de la transcripción ARRDC4, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma cooperativa para reclutar la maquinaria transcripcional endógena e impulsar la regulación al alza sostenida de la expresión endógena de ARRDC4. El uso de dCas9 inactivo frente a nucleasas evita la introducción de roturas de ADN de doble cadena y preserva el locus genómico nativo ARRDC4 y la arquitectura reguladora.

El formato lentiviral ofrece varias ventajas prácticas: la integración genómica estable permite la activación hereditaria a lo largo de las divisiones celulares; las preparaciones de partículas de alto título eliminan la necesidad de producir el virus internamente; y la compatibilidad con tipos de células primarias, no divisibles y resistentes a la transfección amplía la accesibilidad experimental. La transducción exitosa puede confirmarse y enriquecerse mediante selección con triple antibiótico utilizando puromicina, higromicina y blasticidina.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.