ARRDC4 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-406413-ACT

ARRDC4 (arrestin domain containing 4) é uma proteína adaptadora humana da família das α-arrestinas, implicada na regulação do tráfego de proteínas de membrana e na atenuação de sinais, ao acoplar receptores e transportadores a vias endocíticas e dependentes de ubiquitina. Ela tem sido associada a respostas celulares ao estresse energético e de nutrientes, incluindo a modulação do metabolismo de glicose e lipídios por meio de interações com redes de sinalização metabólica. A expressão de ARRDC4 responde a sinais metabólicos e pode influenciar a renovação (turnover) de receptores e programas transcricionais a jusante que moldam a adaptação celular ao estresse. A atividade ou expressão desregulada de ARRDC4 tem sido investigada em contextos associados à disfunção metabólica e a alterações na homeostase de sinalização relevantes para a biologia de doenças complexas.

ARRDC4 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de ARRDC4 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

ARRDC4 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus ARRDC4 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição ARRDC4, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de ARRDC4. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus ARRDC4 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de ARRDC4 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via ARRDC4 em células tumorais com expressão de ARRDC4 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.