Datos CRISPR no: la imagen ilustra la calidad de los anticuerpos para visualizar los resultados de los experimentos CRISPR.
Datos CRISPR no: la imagen ilustra la calidad de los anticuerpos para visualizar los resultados de los experimentos CRISPR.
Plásmido Doble Nickase (m) ARP: sc-428989-NIC
- Especies Diana: mouse
- 20 µg de plásmido de ADN purificado listo para la trasfección; suficiente para 20 transfecciones máximo
- El Plásmido Double Nickase (m)ARP consisten en un par de plásmidos cada uno codificando una nucleasa Cas9 mutada D10A y una guia de ARN de 20 nucleótidos (gRNA) diseñados para una mayor especificidad que el homologo CRISPR/Cas9 KO
- Las secuencias de gRNA tienen una diferencia de unas 20 pb para permitir un corte doble mediado por Cas9 en el ADN que imita el doble corte
- Uno de los plásmidos contiene el gen de resistencia a puromicina para la selección y el otro el marcado GFP para confirmar visualmente la transfección
- El plásmido de doble nickasa ARP (m) y el plásmido de doble nickasa ARP (m2) codifican diseños distintos de pares de gRNA dirigidos a Manf. Puede que esté disponible uno o ambos diseños
- Tras la transfección, la eficacia del knockout puede comprobarse mediante WB, IF ó IHC utilzando el anticuerpo: ARP Anticuerpo (B-3): sc-515906
Información sobre pedidos
| Nombre del producto | Número de catálogo | UNIDAD | Precio | CANTIDAD | Favoritos | |
Plásmido Doble Nickase (m) ARP | sc-428989-NIC | 20 µg | $410.00 |
El factor neurotrófico derivado de astrocitos mesencefálicos (MANF) es una proteína residente del retículo endoplásmico e inducible por estrés que favorece la proteostasis y la homeostasis de la vía secretora en células de mamífero. En el ratón, MANF está estrechamente vinculado a la respuesta a proteínas mal plegadas (UPR) y al control de calidad asociado al retículo endoplásmico (ERAD), modulando programas de supervivencia celular bajo estrés del RE y alteraciones del plegamiento proteico. La señalización alterada de MANF se ha estudiado en contextos de neurodegeneración, estrés metabólico y daño tisular inflamatorio, donde confluyen el estrés del RE y la vulnerabilidad específica de ciertos tipos celulares. Estas características hacen de MANF un punto de referencia útil para investigar la adaptación al estrés del RE, la función de células secretoras y la remodelación transcripcional ligada al estrés en modelos biomédicos.
ARP El plásmido de doble nicasa (m) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus Manf en líneas celulares mouse. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de Manf. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de Manf. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.
Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con Manf alterado.
Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.