Plasmide CRISPR/Cas9 KO AROS-29 (h): sc-412385

Présentation

TMEM161A code pour AROS-29, une protéine transmembranaire à passages multiples qui se localise aux membranes intracellulaires et dont on pense qu’elle contribue à l’organisation membranaire et à la signalisation homéostatique dans les épithéliums et d’autres types de cellules somatiques. Bien que ses partenaires moléculaires restent imparfaitement définis, TMEM161A a été associée à des processus impliquant l’intégrité des organites, les réponses cellulaires au stress et la régulation de voies liées à la croissance, qui recoupent le trafic membranaire et la protéostase. Des données d’expression et d’associations génétiques ont relié TMEM161A à des traits affectant la fonction épithéliale et la susceptibilité à l’inflammation, ce qui soutient la poursuite des recherches sur son rôle dans le maintien des tissus. L’étude de la biologie d’AROS-29 peut aider à clarifier comment des régulateurs enchâssés dans la membrane influencent la fidélité de la signalisation et les transitions d’état cellulaire pertinentes pour les mécanismes de maladies complexes.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO AROS-29 (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène TMEM161A dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du TMEM161A, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert TMEM161A à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine AROS-29.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en TMEM161A pour l'étude de la signalisation de AROS-29, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de TMEM161A essentiels à la fonction de AROS-29
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de TMEM161A pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le AROS-29 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le AROS-29 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus TMEM161A. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le AROS-29 plasmide HDR (h) et le AROS-29 (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie TMEM161A pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles TMEM161A définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.