Plasmide CRISPR/Cas9 KO Arnt 2 (h): sc-403101

Présentation

ARNT2 (aryl hydrocarbon receptor nuclear translocator 2) code un facteur de transcription bHLH-PAS qui forme des hétérodimères avec des partenaires tels que des membres de la famille HIF afin de réguler des programmes d’expression génique dépendants des stimuli. Arnt2 contribue aux réseaux transcriptionnels de détection de l’oxygène et du développement en favorisant la liaison à l’ADN au niveau des éléments de réponse à l’hypoxie et en coordonnant, de manière dépendante de la chromatine, le contrôle des loci cibles. Il est particulièrement pertinent pour les études de différenciation neuronale et d’adaptation cellulaire au stress métabolique ou environnemental, où une transcription dépendante d’ARNT2 peut influencer la survie et des signatures géniques spécifiques de lignée. La dérégulation des voies associées à ARNT2 a été liée à des altérations des sorties de signalisation hypoxique et à des phénotypes neurodéveloppementaux, ce qui en fait un nœud utile pour l’exploration mécanistique des circuits transcriptionnels à domaine PAS.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO Arnt 2 (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène ARNT2 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du ARNT2, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert ARNT2 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine Arnt 2.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en ARNT2 pour l'étude de la signalisation de Arnt 2, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de ARNT2 essentiels à la fonction de Arnt 2
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de ARNT2 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le Arnt 2 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le Arnt 2 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus ARNT2. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le Arnt 2 plasmide HDR (h) et le Arnt 2 (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie ARNT2 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles ARNT2 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.