Plásmido CRISPR de Activación (h) Arnt 2: sc-403101-ACT

ARNT2 (translocador nuclear del receptor de hidrocarburos de arilo 2) codifica un factor de transcripción bHLH-PAS (hélice-bucle-hélice básica con dominio PAS) que forma heterodímeros con socios que contienen dominio PAS para acoplar señales ambientales y del desarrollo a programas de expresión génica. Como translocador nuclear, ARNT2 participa en redes transcripcionales sensibles al oxígeno y a xenobióticos, integrando señales que moldean la diferenciación neuronal, la adaptación metabólica y las respuestas al estrés celular. La transcripción regulada por ARNT2 se vincula a vías que controlan la expresión génica dependiente de la hipoxia y el patrón neurodesarrollativo, con relevancia para trastornos que implican una regulación génica neural y señalización de estrés alteradas. La actividad desregulada de ARNT2 también se ha estudiado en el contexto de la reconfiguración de vías en cáncer y otras enfermedades en las que el control transcripcional bHLH-PAS influye en el estado celular y en programas de supervivencia.

Arnt 2 El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de ARNT2 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

Arnt 2 El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus ARNT2 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional ARNT2, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de Arnt 2. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo ARNT2 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de Arnt 2 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía Arnt 2 en células tumorales con expresión de ARNT2 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.