Plasmide CRISPR/Cas9 KO ARK-2 (m): sc-423197

Présentation

Aurkb (ARK-2) code une kinase sérine/thréonine qui constitue le cœur catalytique du complexe des passagers chromosomiques, coordonnant la condensation des chromosomes, la correction des erreurs d’attachement kinétochore–microtubule et la cytokinèse. L’activité d’ARK-2 est régulée tout au long de la mitose par une signalisation dépendante de la phosphorylation et par une relocalisation spatiale des centromères vers la zone médiane du fuseau, couplant la satisfaction du point de contrôle d’assemblage du fuseau à une ségrégation fidèle des chromosomes. La perturbation d’Aurkb altère la dynamique de la chromatine et la formation de l’anneau contractile, entraînant aneuploïdie et micronoyaux, des processus fréquemment exploités pour étudier l’instabilité du génome. Une signalisation AURKB modifiée a été impliquée dans des phénotypes prolifératifs et dans l’instabilité chromosomique associée aux tumeurs, ce qui en fait une cible récurrente dans la recherche sur le cycle cellulaire et la fidélité mitotique.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO ARK-2 (m) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène Aurkb dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du Aurkb, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert Aurkb à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine ARK-2.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en Aurkb pour l'étude de la signalisation de ARK-2, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de Aurkb essentiels à la fonction de ARK-2
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de Aurkb pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le ARK-2 plasmide CRISPR/Cas9 KO (m) et le ARK-2 plasmide CRISPR/Cas9 KO (m2) ciblent des sites distincts au sein du locus Aurkb. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le ARK-2 plasmide HDR (m) et le ARK-2 (m2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie Aurkb pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles Aurkb définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.