ARK-1 Plásmido CRISPR/Cas9 KO (m): sc-423198

Descripción general

Aurka codifica la quinasa de serina/treonina ARK-1 (quinasa Aurora A), un regulador central de la maduración del centrosoma, la entrada en mitosis y el ensamblaje del huso bipolar en células de ratón. ARK-1 coordina eventos de fosforilación que sostienen la dinámica de los microtúbulos y la segregación cromosómica, y actúa dentro de redes de control del ciclo celular que incluyen la progresión mitótica dependiente de PLK1 y CDK1, así como la vigilancia de los puntos de control. La desregulación de la actividad de Aurka altera la estabilidad genómica y se ha asociado con fenotipos de proliferación anómala relevantes para la transformación oncogénica y la aneuploidía. Como resultado, Aurka se utiliza ampliamente como un nodo mecanístico para estudiar la fidelidad mitótica, los defectos en el ensamblaje del huso y las respuestas al estrés vinculadas al ciclo celular.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO ARK-1 (m) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen Aurka en líneas celulares mouse. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del Aurka junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de Aurka tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína ARK-1.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en Aurka para la investigación de la señalización de ARK-1, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de Aurka críticos para la función de ARK-1
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de Aurka para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido ARK-1 CRISPR/Cas9 KO (m) y el plásmido ARK-1 CRISPR/Cas9 KO (m2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus Aurka. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR ARK-1 (m) y el plásmido HDR ARK-1 (m2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología Aurka para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana Aurka definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.