ARK-1 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (m): sc-423198

Panoramica

Aurka codifica la chinasi serina/treonina ARK-1 (Aurora chinasi A), un regolatore centrale della maturazione del centrosoma, dell’ingresso in mitosi e dell’assemblaggio del fuso bipolare nelle cellule di topo. ARK-1 coordina eventi di fosforilazione che sostengono la dinamica dei microtubuli e la segregazione dei cromosomi, operando all’interno di reti di controllo del ciclo cellulare che includono la progressione mitotica dipendente da PLK1 e CDK1 e la sorveglianza dei checkpoint. Un’attività di Aurka deregolata compromette la stabilità genomica ed è stata associata a fenotipi di proliferazione anomala rilevanti per la trasformazione oncogenica e l’aneuploidia. Di conseguenza, Aurka è ampiamente utilizzato come nodo meccanicistico per studiare la fedeltà mitotica, i difetti di assemblaggio del fuso e le risposte allo stress legate al ciclo cellulare.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO ARK-1 (m) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene Aurka in linee cellulari mouse. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del Aurka insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto Aurka a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina ARK-1.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di Aurka per lo studio della segnalazione di ARK-1, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni Aurka critici per la funzione di ARK-1
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di Aurka per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal ARK-1 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m) e dal ARK-1 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus Aurka. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal ARK-1 Plasmide HDR (m) e il plasmide HDR ARK-1 (m2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia Aurka per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio Aurka definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.