Not CRISPR data: the image illustrates antibody quality for visualizing CRISPR experiment results.
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ARH CRISPR/Cas9 KOプラスミド (h): sc-406114
- 対象生物種: human
- 20 µg のトランスフェクション準備済み、精製したプラスミドDNA、～20回トランスフェクション
- ARH CRISPR/Cas9 ノックアウト（KO）プラスミド（h）は、GeCKO v2ライブラリ由来の配列を用いて最大のノックアウト効率を実現するよう設計された、Cas9ヌクレアーゼおよび標的特異的な20塩基対のガイドRNA（gRNA）をそれぞれコードするプラスミドのプールです
- gRNA配列は、Cas9を誘導してARHゲノム座において部位特異的な二本鎖切断（DSBs）を引き起こし、非相同末端結合（NHEJ）を介して遺伝子ノックアウトをもたらします
- ピューロマイシン耐性遺伝子とRFP遺伝子はLoxP部位で挟まれているため、安定したノックアウト細胞株を樹立した後、Creリコンビナーゼ（Creベクター：sc-418923）を用いて選択マーカーを除去することができる。
- トランスフェクションの後、遺伝子ノックアウト効果は、抗体を用いたWB、IFまたはIHCによって検定されることができます: ARH 抗体 (F-11): sc-514106
注文情報
| 製品名 | カタログ # | 単位 | 価格 | 数量 | お気に入り | |
ARH CRISPR/Cas9 KOプラスミド (h) | sc-406114 | 20 µg | $397.00 |
概要
LDLRAP1はアダプタータンパク質ARHをコードしており、ARHはクラスリン介在性エンドサイトーシスの主要因子として、細胞膜での取り込みに際してLDL受容体（LDLR）をAP-2複合体およびクラスリンコートへ結び付けます。ARHはLDLR中のNPXYモチーフを認識し、カーゴ選別、ベシクル形成、ならびにエンドソーム区画を介した受容体トラフィッキングを協調的に制御します。この経路は細胞内コレステロール取り込みとリポタンパク質恒常性の中核を成し、LDLRAP1の機能を脂質代謝ネットワークの制御と結び付けています。LDLRAP1の機能喪失変異は常染色体劣性高コレステロール血症と関連しており、ARHはLDLRの取り込み異常や下流シグナル伝達への影響を解析する上で有用な標的（ノード）となります。
ARH CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）は、human細胞株におけるLDLRAP1遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、LDLRAP1内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。
このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、LDLRAP1のオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、ARHタンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。
このCRISPRノックアウトシステムにより、ARHシグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、LDLRAP1欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。
主な特徴
- ARHの機能に不可欠なLDLRAP1エクソンを標的とするsgRNA
導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
ノックアウト効率を向上させるための、LDLRAP1ゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
トランスフェクションによる導入に対応
設計バリエーション
CRISPRs +/- HDR
- ARH CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）およびARH CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h2）によってコードされるgRNAは、LDLRAP1遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
ARH HDRプラスミド（h）および ARH HDRプラスミド（h2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはLDLRAP1ホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のLDLRAP1標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。
研究用のみ。診断用または治療用ではありません。