ARH CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h): sc-406114

Übersicht

LDLRAP1 kodiert das Adapterprotein ARH, eine Schlüsselkomponente der clathrinvermittelten Endozytose, das den LDL‑Rezeptor an den AP‑2‑Komplex und den Clathrinmantel koppelt, um die Internalisierung an der Plasmamembran zu ermöglichen. ARH erkennt NPXY‑Motive im LDLR und koordiniert die Frachtauswahl, die Vesikelbildung und den Rezeptortransport durch endosomale Kompartimente. Dieser Signalweg ist zentral für die zelluläre Cholesterinaufnahme und die Lipoprotein‑Homöostase und verbindet die Funktion von LDLRAP1 mit der Regulation von Netzwerken des Lipidstoffwechsels. Loss‑of‑function‑Varianten in LDLRAP1 sind mit autosomal‑rezessiver Hypercholesterinämie assoziiert, wodurch ARH ein nützlicher Knotenpunkt ist, um Defekte der LDLR‑Internalisierung und nachgeschaltete Signalkonsequenzen zu untersuchen.

Das ARH CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des LDLRAP1-Gens in human-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des LDLRAP1-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von LDLRAP1 nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die ARH-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von LDLRAP1-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der ARH-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf LDLRAP1-Exone abzielen, die für die ARH-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere LDLRAP1-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom ARH CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) und vom ARH CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des LDLRAP1-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das ARH HDR-Plasmid (h) und ARH HDR-Plasmid (h2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von LDLRAP1-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten LDLRAP1-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.