ARF4 Plásmido CRISPR/Cas9 KO (m): sc-419189

Descripción general

Arf4 codifica el factor de ADP-ribosilación 4 (ARF4), una pequeña GTPasa de la familia ARF que regula el tráfico de membranas y la remodelación lipídica en el Golgi y el sistema endosomal. ARF4 alterna entre estados unidos a GDP y a GTP para coordinar la gemación de vesículas, la clasificación de la carga y el transporte de receptores, incluidas vías que controlan el tráfico secretor y el direccionamiento hacia los cilios. Mediante interacciones con la maquinaria de cubierta/adaptadores y el metabolismo de fosfoinosítidos, ARF4 ayuda a mantener la organización de los orgánulos y la entrega polarizada de membrana. La desregulación del tráfico dependiente de ARF4 se ha implicado en alteraciones de la señalización de receptores, defectos de ciliogénesis y respuestas de estrés celular relevantes para la neurobiología, la homeostasis epitelial y fenotipos asociados a tumores.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO ARF4 (m) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen Arf4 en líneas celulares mouse. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del Arf4 junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de Arf4 tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína ARF4.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en Arf4 para la investigación de la señalización de ARF4, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de Arf4 críticos para la función de ARF4
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de Arf4 para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido ARF4 CRISPR/Cas9 KO (m) y el plásmido ARF4 CRISPR/Cas9 KO (m2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus Arf4. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR ARF4 (m) y el plásmido HDR ARF4 (m2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología Arf4 para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana Arf4 definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.