Aquaporin 3/AQP3 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m): sc-419174
- Zielspezies: mouse
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Aquaporin 3/AQP3 Das CRISPR/Cas9-Knockout (KO)-Plasmid (m) ist ein Pool von Plasmiden, von denen jedes für die Cas9-Nuklease und eine zielspezifische 20-nt-Guide-RNA (gRNA) kodiert, die für maximale Knockout-Effizienz unter Verwendung von Sequenzen aus der GeCKO v2-Bibliothek entwickelt wurde
- gRNA-Sequenzen lenken Cas9 so, dass es ortsspezifische Doppelstrangbrüche (DSBs) im Aquaporin 3/AQP3-Genomlokus induziert, was zu einem Gen-Knockout durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ) führt
- Die Puromycin-Resistenz- und RFP-Gene werden von LoxP-Stellen flankiert, was die Entfernung der Selektionsmarker mittels Cre-Rekombinase (Cre-Vektor: sc-418923) nach der Etablierung stabiler Knockout-Zelllinien ermöglicht
- Nach der Transfektion kann die Effizienz des Gen-Knockouts per Western Blot oder histologisch mit folgendem Antikörper überprüft werden: Aquaporin 3/AQP3: sc-518001
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
Aquaporin 3/AQP3 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m) | sc-419174 | 20 µg | $397.00 |
Übersicht
Aqp3 kodiert Aquaporin 3 (AQP3), einen Aquaglyceroporin-Kanal der Plasmamembran, der den transmembranen Transport von Wasser, Glycerol und anderen kleinen gelösten Stoffen erleichtert und dadurch das zelluläre osmotische Gleichgewicht sowie die Verfügbarkeit metabolischer Substrate beeinflusst. In Mausgeweben wie Niere, Haut und gastrointestinalem Epithel trägt AQP3 zur Hydratation der epithelialen Barriere, zur Volumenregulation und zum glycerolabhängigen Energiestoffwechsel bei und verknüpft damit Membrantransport mit Stressanpassung und Proliferation. Die AQP3-Aktivität kann redoxbezogene Signalwege über Effekte auf den intrazellulären Fluss gelöster Stoffe modulieren und wird häufig im Kontext epithelialer Homöostase, Entzündung und Gewebeumbau untersucht. Eine fehlregulierte AQP3-Expression oder -Lokalisation wurde mit veränderter Wundheilung und entzündlichen Hautphänotypen in Verbindung gebracht, was ihre Relevanz für mechanistische Studien zur Barrierefunktion und krankheitsassoziierten epithelialen Dysfunktion unterstreicht.
Das Aquaporin 3/AQP3 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des Aqp3-Gens in mouse-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des Aqp3-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.
Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von Aqp3 nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die Aquaporin 3/AQP3-Proteinexpression aufheben.
Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von Aqp3-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der Aquaporin 3/AQP3-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.
Hauptmerkmale
- sgRNAs, die auf Aqp3-Exone abzielen, die für die Aquaporin 3/AQP3-Funktion entscheidend sind
Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
Pool von Plasmiden, die auf mehrere Aqp3-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion
Designvarianten
CRISPRs +/- HDRs
- gRNAs, die vom Aquaporin 3/AQP3 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) und vom Aquaporin 3/AQP3 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des Aqp3-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das Aquaporin 3/AQP3 HDR-Plasmid (m) und Aquaporin 3/AQP3 HDR-Plasmid (m2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von Aqp3-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten Aqp3-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.